Termodinámica del plegado de proteínas de membrana medido por espectroscopia de fluorescencia
Summary
Este artículo detalla el procedimiento de vídeo experimental para la obtención de la energía libre de Gibbs del plegamiento de las proteínas de membrana de triptófano fluorescencia.
Abstract
Plegamiento de proteínas de membrana es un tema emergente con un significado fundamental y relacionadas con la salud. La abundancia de proteínas de membrana en las células subyace la necesidad de un estudio integral del plegamiento de esta familia de proteínas en todas partes. Además, los avances en nuestra capacidad para caracterizar las enfermedades asociadas con las proteínas mal plegadas, han motivado importantes esfuerzos experimentales y teóricos en el campo de plegamiento de proteínas. Los rápidos avances en este campo tan importante es, por desgracia obstaculizado por los problemas inherentes asociados con las proteínas de membrana y de la complejidad del mecanismo de plegado. Aquí, se describe un procedimiento experimental para la medición de la propiedad termodinámica de la energía libre de Gibbs se desarrolla en ausencia de desnaturalizante, Δ G ° H 2 O, una proteína de membrana integral representante de E. coli. Este protocolo se centra en la aplicación de la espectroscopia de fluorescencia para determinar las poblaciones de equilibrio de los estados plegado y desplegado en función de la concentración de desnaturalizante. Consideraciones experimentales para la preparación de vesículas de lípidos sintéticos, así como pasos clave en el procedimiento de análisis de datos se destacan. Esta técnica es muy versátil y puede llevarse a cabo con diferentes tipos de desnaturalizante, incluyendo la temperatura y pH, así como en diversos entornos de plegado de los lípidos y las micelas. El protocolo actual es el que puede ser generalizado a cualquier membrana o proteínas solubles que se reúne el conjunto de los criterios expuestos.
Protocol
Discussion
El actual protocolo describe la generación de curvas de desarrollo asociados a la membrana de las proteínas y los péptidos que contienen residuos de triptófano. En este caso, se asume que la fluorescencia de triptófano refleja si la proteína se dobla y se introduce en las vesículas de lípidos sintéticos, o se desarrolló en la solución. Supuestos adicionales, como el plegado de dos estados y la dependencia lineal de energía libre con la concentración de desnaturalizante, se hacen en el presente informe;. Mod…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Damos las gracias a Beijing Wu para el uso de sus datos. Este trabajo fue apoyado por un premio CARRERA NSF a JEK
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMPC | Avanti Polar Lipids | 850345C | ||
| Urea | MP Biochemicals | 04821527 | ||
| Potassium Phosphate Dibasic | Fisher | P288 | ||
| Potassium Phosphate Monobasic | Fisher | P285 |
Referências
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