Generación de las células troncales nerviosas de desechados Humanos tejido cortical fetal
Summary
Un método sencillo y fiable en el aislamiento y cultivo de células madre neurales en humanos descartados tejido cortical fetal se describe. Cultivos derivados de enfermedades neurológicas conocidas humanos pueden ser utilizados para la caracterización de los patológicos procesos celulares y moleculares, así como ofrecer una plataforma para evaluar la eficacia farmacológica.
Abstract
Las células madre neurales (NSC) residen en la zona ventricular neuroepitelio durante el desarrollo de la placa cortical. Estos primeros progenitores en última instancia, dan lugar a los progenitores intermedios y más tarde, los diferentes subtipos de células neuronales y gliales que forman la corteza cerebral. La capacidad de generar y ampliar NSCs humanos (los llamados neuroesferas) a partir de tejido fetal normal descarta proporciona un medio con el cual estudiar directamente los aspectos funcionales de la normalidad del desarrollo humano NSC 1.5. Este enfoque también puede ser dirigido hacia la generación de NSCs de trastornos neurológicos conocidos, ello se traduzca en la oportunidad de identificar los procesos de enfermedad que altera la proliferación de progenitores, la migración y la diferenciación de 6-9. Nos hemos centrado en la identificación de los mecanismos patológicos en humanos NSCs síndrome de Down que pueden contribuir a acelerar el fenotipo de la enfermedad de Alzheimer 10,11. Ni en vivo ni in vitro modelos de ratón se puede replicar el repertorio idéntico de genes localizados en el cromosoma humano 21.
Aquí se utiliza un método sencillo y fiable para aislar el síndrome de Down NSCs de corteza fetal humano abortado y crecer en cultivo. La metodología ofrece aspectos específicos de la recolección de los tejidos, la disección con puntos de referencia anatómicos limitado, separación celular, placas y pases de NSCs humanos. También proporcionamos algunos protocolos básicos para inducir la diferenciación de las NSCs humanos en subtipos de células más selectivo.
Protocol
Discussion
Existen varios enfoques hacia el cultivo de tejidos frescos y la producción de líneas celulares humanas. Históricamente, el tejido fresco ha sido cosechados y cultivados de inmediato para generar diversos tipos de células en el sistema nervioso central. Esta estrategia, sin embargo está claramente limitado por el número de muestras que se pueden obtener, que en el caso de muestras humanas, suele ser bastante pequeña. Teniendo en cuenta el grado mínimo de la manipulación, las células neuronales cultivadas reci?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado en parte por los Institutos Nacionales de Salud: HD054347 y NS063997-01 de VLS. Este trabajo también fue apoyado en parte por el Fondo Empire State de células madre a través del Estado de Nueva York Departamento de Salud Contrato # C024324 de VLS. Las opiniones expresadas aquí son de exclusiva responsabilidad del autor y no reflejan necesariamente el parecer de la Junta del Empire State de Células Madre, el Estado de Nueva York Departamento de Salud, o el Estado de Nueva York. VLS es un Doris Duke destinatario científico clínico Premio del Desarrollo. También agradecemos el profesor Timothy Vartanian por su don de Anti-O1, O4 Anti-anticuerpos.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| KNOCKOUT DMEM/F12 | Invitrogen | 12660-012 | Dissociation medium |
| Stem Pro NSC SFM | Invitrogen | A10509-01 | Culture medium |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen | 10091-148 | Frozen medium |
| Hanks solution (-Ca2+, -Mg2+) | Invitrogen | 14175-095 | Dissociation medium |
| DMSO | Sigma-Aldrich | D2650 | Frozen medium |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 431788 | Dissociation medium |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | 158127 | Fixation solution |
| bFGF | R&D | 234-FSE | Differentiation medium |
| SHH | R&D | 1845-SH | Differentiation medium |
| PDGF-AA | R&D | 221-AA | Differentiation medium |
| B27 | Invitrogen | 17504-044 | Differentiation medium |
| Mouse Anti-MAP2 | Sigma-Aldrich | M2320 | 1:200 |
| Rabbit Anti-DCX | Cell signaling | 4604s | 1:200 |
| Rabbit Anti-GFAP | DAKO | Z0334 | 1:200 |
| Rabbit Anti-S100B | DAKO | Z0311 | 1:200 |
| Rabbit Anti-O1 | gifts of Professor Timothy Vartanian* | 1:50 | |
| Rabbit Anti-O4 | Gifts of Professor Timothy Vartanian* | 1:50 | |
| 40μm cell strainer | BD Falcon | 352340 |
* Timothy Vartanian, MD, PhD, Department of Neurology and Neuroscience, Weill Cornell Medical College, New York, USA
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