सड़न रोकनेवाला प्रयोगशाला तकनीक: खंड सीरम विज्ञानी Pipettes और Micropipettors के के साथ स्थानांतरण

Summary

जब एक प्रयोगशाला में काम कर रहे है, यह प्रदूषण के स्रोतों को कम करने के लिए जरूरी है. सड़न रोकनेवाला तकनीक प्रक्रियाओं है कि संस्कृतियों और अभिकर्मकों के हस्तांतरण की अनुमति है जबकि गैर बाँझ सतहों के साथ संपर्क से बचने के लिए संदर्भित करता है. सीरम वैज्ञानिक pipettes और micropipettors प्रयोगों में इस्तेमाल समाधान के बाँझपन समझौता किए बिना सटीक संस्करणों को मापने के लिए उपयोग किया जाता है.

Abstract

Microorganisms are everywhere – in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ubiquity of microbes creates a copious supply of potential contaminants in a laboratory. To ensure experimental success, the number of contaminants on equipment and work surfaces must be minimized. Common among many experiments in microbiology are techniques involving the measurement and transfer of cultures containing bacterial cells or viral particles. To do so without contacting non-sterile surfaces or contaminating sterile media requires (1) preparing a sterile workspace, (2) precisely setting and accurately reading instruments for aseptic transfer of liquids, and (3) properly manipulating instruments, cultures flasks, bottles and tubes within a sterile field. Learning these procedures calls for training and practice. At first, actions should be slow, deliberate, and controlled with the goal being for aseptic technique to become second nature when working at the bench. Here we present the steps for measuring volumes using serological pipettes and micropipettors within a sterile field created by a Bunsen burner. Volumes range from microliters (μl) to milliliters (ml) depending on the instrument used. Liquids commonly transferred include sterile broth or chemical solutions as well as bacterial cultures and phage stocks. By following these procedures, students should be able to: •Work within the sterile field created by the Bunsen burner flame. •Use serological pipettes without compromising instrument sterility.• Aspirate liquids with serological pipettes, precisely reading calibrated volumes by aligning the meniscus formed by the liquid to the graduation marks on the pipette. •Keep culture bottles, flasks, tubes and their respective caps sterile during liquid transfers. •Identify different applications for plastic versus glass serological pipettes. •State accuracy limitations for micropipettors. •Precisely and accurately set volumes on micropipettors. •Know how to properly use the first and second stop on a micropipettor to aspirate and transfer correct volumes.

Protocol

1. एक बाँझ कार्यस्थान तैयार करें अपने कार्य क्षेत्र में किसी भी नसबंदी प्रक्रियाओं को शुरू करने से पहले, अपने हाथ अच्छी तरह धो एंटीसेप्टिक साबुन और गर्म पानी के साथ. यकीन है कि अपने हाथों किसी भी समय आपको संदेह है कि आप अपने प्रयोगात्मक जोड़तोड़ से संदूषण है फिर से धो. दूर प्रयोगशाला बेंच पर अपने कार्य क्षेत्र cluttering के सामग्री को साफ़ करें. निकालें एक पूर्व सिक्त निस्संक्रामक कनस्तर से पोंछे और नीचे पूरे क्षेत्र को मिटा. निस्संक्रामक के लिए लुप्त हो जाना करने की अनुमति दें – पोंछ सूखा नहीं है! (Isopropanol या 70% इथेनॉल) शराब या यौगिकों (ओ phenylphenol) phenolic जैसे disinfectants का उपयोग करें. Aerosolization, या एक ठीक बैक्टीरियल कोशिकाओं, और सूक्ष्म जैविक contaminants के प्रसार युक्त धुंध का उत्पादन रोकने के लिए, एक निचोड़ बोतल से निस्संक्रामक वितरण से बचें. सूक्ष्मजीवों के परिशोध एक सतहों संक्रामक रोगाणुओं से मुक्त करना सबसे प्रभावी तरीकों में से एक है. यहां तक ​​कि अगर किसी को हाल ही में प्रयोगशाला बेंच का इस्तेमाल किया गया है और बेंच शीर्ष नीचे निस्संक्रामक के साथ साफ हो गया था, हमेशा नीचे बेंच पोंछते द्वारा अपने प्रयोगशाला समय शुरू करते हैं. बाद निस्संक्रामक पूरी तरह से सूख गया है, एक आग लगनेवाला उपयोग Bunsen बर्नर प्रकाश के. लौ समायोजित इतना है कि एक नीले रंग की शंकु लौ के बीच में देखा जा सकता है. लौ अब एक updraft का उत्पादन होता है, या हवा संवहन धाराओं जिसमें गर्म हवा उगता है और (चित्रा 1) लौ से दूर है. गर्मी बढ़ जाता है के रूप में, सूक्ष्म जीवाणुओं और धूल कणों को ऊपर की ओर और तत्काल कार्य क्षेत्र से दूर मजबूर कर रहे हैं. धीरे से काम, ध्यान से, और जानबूझ कर इस क्षेत्र के भीतर Bunsen बर्नर के द्वारा बनाई गई सभी समय, एक बाँझ क्षेत्र के रूप में जाना जाता है. पर पूरी प्रक्रिया के दौरान Bunsen बर्नर रखें. नीले रंग की शंकु के टिप लौ का सबसे हिस्सा है. सावधान रहो करने के लिए तेजी से आंदोलनों कि नाटकीय रूप से एअर इंडिया बदलने के द्वारा updraft परेशान नहींप्रयोगशाला बेंच के आसपास r धाराओं. Bunsen बर्नर के साथ एक updraft बनाना सूक्ष्मजीवों और धूल बेंच पर या खुली बोतलें, ट्यूब या कार्य क्षेत्र में बोतल में गिरने की संभावना कम से कम. सभी बाँझ क्षेत्र के निकट प्रयोगशाला बेंच पर प्रक्रिया के लिए आवश्यक आपूर्ति को व्यवस्थित करें. सुनिश्चित करें कि सभी सामग्री को ठीक से लेबल कर रहे हैं. आपूर्ति pipettes और सीरम वैज्ञानिक micropipettors, बाँझ संस्कृति ट्यूब, बाँझ बोतल, मीडिया शोरबा युक्त बोतलें, बाँझ microcentrifuge के ट्यूब, micropipettor सुझावों, ट्यूबों के लिए रैक, बैक्टीरियल सेल संस्कृतियों, और फेज स्टॉक शामिल हो सकते हैं. तरल मीडिया 121 ° सी में एक autoclave में तरल की स्थापना पर कम से कम 15 मिनट के लिए निष्फल होना चाहिए. मीडिया की बड़ी मात्रा में (1L>) अब आटोक्लेव समय की आवश्यकता होती है. Labware 121 ° सी में एक autoclave में (सूखा) गुरुत्वाकर्षण सेटिंग पर कम से कम 30 मिनट के लिए निष्फल होना चाहिए. सामान्य में, बाँझ समाधान 4 में संग्रहीत किया जा सकता हैडिग्री सेल्सियस 5 महीने के लिए. ध्यान दें कि भंडारण समय काफी एंटीबायोटिक दवाओं के रूप में अस्थिर घटकों को रोकने के समाधान के लिए कम है – हमेशा के लिए निर्माता की सिफारिशों की जाँच करें. 2. सीरम विज्ञानी Pipettes का उपयोग तरल पदार्थ स्थानांतरण सीरम विज्ञानी pipettes कई आकारों और विकल्प में आते हैं: प्लास्टिक या ग्लास, प्रयोज्य या पुन: प्रयोज्य खामियों को दूर, या अनप्लग. इन संस्करणों के लिए एक 0.1 मिलीग्राम से 25 मिलीग्राम से लेकर देने के लिए calibrated हैं. सीरम वैज्ञानिक pipettes के लिए आम आकार 5 मिलीग्राम, 10 मिलीग्राम और 25 मिलीग्राम और 0.1 मिलीग्राम या उससे अधिक (पैनल चित्रा 2 के एक) की सड़न रोकनेवाला तरल हस्तांतरण के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए. वहाँ भी बड़ा सीरम वैज्ञानिक pipettes कि संस्करणों 100 मिलीलीटर के लिए वितरित कर सकते हैं कर रहे हैं, लेकिन, इस प्रोटोकॉल का ध्यान अधिक सामान्य है, छोटे आकार pipettes पर है. एक रूई प्लग के साथ पूर्व निष्फल pipettes सूक्ष्म जीव विज्ञान और टिशू कल्चर प्रयोगों के लिए की जरूरत है. प्लग से हटाया नहीं जाना चाहिएविंदुक के पी, यह के विंदुक overfilling के लिए एक बाधा के रूप में कार्य करने के लिए डिज़ाइन किया गया है. विभिन्न अनुप्रयोगों प्लास्टिक की तुलना में कांच के सीरम वैज्ञानिक pipettes के लिए कहते हैं. ग्लास कार्बनिक सॉल्वैंट्स लिए आवश्यक है. या तो जब प्रयोगशाला बेंच शीर्ष पर BSL-1 प्रयोगों प्रदर्शन इस्तेमाल किया जा सकता है. केवल प्लास्टिक बीएसएल-2 जीवों जहां एक Bunsen बर्नर का इस्तेमाल नहीं किया जा सकता है के साथ एक जैवसुरक्षा कैबिनेट में काम कर इस्तेमाल किया जा सकता है. यह भी सिफारिश की है कि प्लास्टिक पिघला हुआ अगर के हस्तांतरण से जुड़े अनुप्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया जा. सीरम वैज्ञानिक pipettes दो प्रकार के हैं: टीसी ("शामिल") या टीडी ("देने"). टीसी pipettes टिप सहित सभी मात्रा, उद्धार, और हो "बाहर उड़ा चाहिए या निर्धारित मात्रा से rinsed. टीडी pipettes टिप है कि वितरित नहीं किया जाना चाहिए में एक छोटा सा छोड़ करने के लिए calibrated हैं. का पता लगाने के लिए यह किस प्रकार है (चित्रा 3) शीर्ष के पास विंदुक के शरीर पर लेबल की जाँच करने के लिए सुनिश्चित करें. सबसे अधिक इस्तेमाल किया टीडी pipettes, जो बाजार कर रहे हैंशीर्ष पर डबल छल्ले के साथ ked के. एक बाँझ प्लास्टिक सीरम वैज्ञानिक विंदुक (यह भी एक बड़ा हस्तांतरण विंदुक कहा जाता है) ले लो और ध्यान से अंत में रूई प्लग के साथ यह एक केले की त्वचा की तरह दूर छीलने द्वारा कागज आस्तीन हटाने पूरे आस्तीन दूर नहीं है, की नोक की सुरक्षा विंदुक कि स्थानांतरित किया जा तरल के साथ संपर्क में आ जाएगा. अपने हाथों से ही विंदुक (स्नातक स्तर की पढ़ाई के निशान से ऊपर) के शीर्ष टच. एक बाँझ समाधान में एक प्रयोग किया विंदुक के साथ कभी नहीं जाना, भले ही महान देखभाल के लिए यह बाँझ रखने के लिए लिया गया है. ग्लास सीरम वैज्ञानिक pipettes आम तौर पर धातु के कनस्तरों (चित्रा 2 के पैनल बी) में जमा हो जाती है. कनस्तर के शीर्ष ढीला टोपी तो ध्यान से, और लौ टोपी और कनस्तर के खुले छोर को दूर. टोपी के नीचे रखें, कीटाणुरहित बेंच पर अपने पक्ष पर. कनस्तर से यह क्षैतिज पकड़े द्वारा एक विंदुक निकालें और धीरे यह मिलाते तो एक या दो pipet के सबसे ऊपरtes एक इंच के बारे में बाहर छड़ी और आसानी से समझा जा सकता है. अपने पक्ष पर कनस्तर नीचे लेटाओ और एक विंदुक हटा, लेकिन सतर्क हो कंटेनर में अन्य pipettes छू नहीं. अपने हाथों से स्पर्श नहीं विंदुक के नीचे टिप, और अन्य गैर बाँझ सतहों के साथ टिप के संपर्क से बचें. प्रत्यय ऐसे एक बल्ब, पंप, या सीरम वैज्ञानिक विंदुक के शीर्ष अंत करने के लिए बंदूक के रूप में एक विंदुक सहायता के. प्लास्टिक विंदुक से कागज आस्तीन निकालें. अपने दाहिने हाथ में पिपेट सहायता पकड़. अगर एक ग्लास विंदुक का उपयोग Bunsen बर्नर लौ में 1-3 सेकंड के लिए नीले रंग की शंकु के माध्यम से विंदुक के तीसरे तल से गुजारें. विंदुक 180 ° घुमाएँ के रूप में यह लौ के माध्यम से गुजरता है. प्लास्टिक pipettes और ट्यूबों flamed है नहीं किया जा सकता है. यदि बाएँ हाथ अपने बाएँ हाथ में पिपेट सहायता पकड़ और अपने दहिने हाथ के साथ संस्कृति की बोतलें और ट्यूबों के बाद जोड़तोड़ के आचरण. प्रदूषित प्लास्टिक pipettes साथ हो जाता है जब अंतिम कांग्रेस वापसआस्तीन से पिपेट की hes क्योंकि बाँझ टिप अपने हाथों से छुआ आस्तीन का हिस्सा के साथ संपर्क में आता है. बाँझ मीडिया युक्त बोतल टोपी निकालें. जगह नहीं है लेकिन प्रयोगशाला बेंच पर टोपी यह अपने दाहिने हाथ की अंगूठी उंगली और हथेली के बीच में पकड़ जबकि अंगूठे के साथ विंदुक सहायता से छेड़छाड़, सूचकांक और एक ही हाथ (चित्रा 4) की उंगलियों के बीच. एक 45 ° कोण पर बोतल होल्डिंग, लेम्प बर्नर की लौ के माध्यम से बोतल के रिम के पास खुला बोतल के चारों ओर एक बाँझ क्षेत्र बनाने के. हालांकि सबसे अच्छा बचा है, अगर तुम टोपी डाल नीचे जगह है, यह एक कीटाणुरहित सतह पर नीचे चेहरा. एक टोपी है कि चेहरे के साथ, वहाँ वस्तुओं या हाथ की आंदोलनों से संदूषण का एक बड़ा मौका है, हवा धाराओं कि सूक्ष्मजीवों और धूल कणों टोपी के अंदर सतह के लिए उतरना करने के लिए कारण है. ज्वलंत का उद्देश्य नहीं बाँझ लेकिन उद्घाटन ओ गर्मच बोतल और हवा संवहन धाराओं बनाने और खोलने (यानी, updraft) से दूर. गर्म, बढ़ती हवा बोतल में प्रवेश करने से धूल कणों और अन्य contaminants को रोकने में मदद करता है. संभव के रूप में कम समय के रूप में के लिए बाँझ कंटेनर खुला रखें. यह वायुवाहित सूक्ष्मजीवों की प्रक्रिया के दौरान एक न्यूनतम करने के लिए प्रवेश के अंक को रखने के लिए महत्वपूर्ण है. खांसने, छींकने, बात कर, और अन्य अनजाने आंदोलन जबकि बाँझ कंटेनर खुले हैं से बचें. एक बाँझ क्षेत्र (यानी, खुला बोतल या बोतल, ट्यूब और बोतल टोपी के अंदर) के शीर्ष पर कभी पास हाथ और अंगुलियों को एक बार वे Bunsen बर्नर लौ के माध्यम से पारित किया गया है. हमेशा एक खुला लौ के साथ जब बाँझ ट्यूब या बोतल खोलने का काम. कभी नहीं एक से अधिक ट्यूब, बोतल, या एक बार में कुप्पी बेंच पर खुला है. ज्वलंत खोलने पर और बस से पहले बंद ट्यूबों, बोतलें, बोतल और तुरंत किया जाना चाहिए. Serol की टिप प्लेसबोतल के में ogical विंदुक बाँझ मीडिया वाले तो महाप्राण (व्यंजन), या नमूना aseptically बोतल से, आकर्षित. विंदुक सहायता का उपयोग करने के लिए पिपेट में नमूना के प्रवाह को नियंत्रित करने के लिए. ठीक कैलिब्रेटेड विंदुक (चित्रा 5) पर स्नातक स्तर की पढ़ाई के निशान के लिए तरल स्तंभ के शीर्ष पर गठित नवचंद्रक aligning से विंदुक में तैयार की मात्रा पढ़ें. नहीं pipet नहीं! मुँह हमेशा एक pipet सहायता का उपयोग करें (पंप, बल्ब, या बंदूक). संख्याओं के अनुक्रम ध्यान जब से aspirated मात्रा का निर्धारण. संख्या मुद्रित किया जा सकता है शीर्ष, या इसके विपरीत, या दोनों दिशाओं में बार बार करने के लिए टिप हो सकता है. जब मात्रा पढ़ने, हमेशा विंदुक खड़ी पकड़, भूमि पर सीधा, और आंख के स्तर पर मर तरल नवचंद्रक देखने. सीरम विज्ञानी pipettes केवल छोटी चिह्नित वेतन वृद्धि, जो आम तौर पर 5 मिलीग्राम और 10 मिलीग्राम pipettes और 25 मिलीग्राम pipettes के लिए 0.2 मिलीग्राम के लिए 0.1 मिलीग्राम है के रूप में सही कर रहे हैं. मैंच अधिक सटीक की जरूरत है, एक सीरम वैज्ञानिक विंदुक micropipettor के साथ संयोजन में उपयोग किया जा सकता है. Bunsen बर्नर लौ के माध्यम से बोतल के रिम को एक बार फिर से दर्रा, तो बोतल पर टोपी वापस जगह है. मीडिया बोतल अलग निर्धारित करें. Bunsen बर्नर के साथ एक बोतल बंद की भीड़ में अपने आप को जला नहीं क्या. एक परीक्षण या ट्यूब कुप्पी अपने बाएँ हाथ में पकड़. निकालें और टोपी के रूप में कदम # 4 ऊपर में वर्णित पकड़. ट्यूब या लेम्प बर्नर में कुप्पी के रिम ज्वलंत द्वारा एक बाँझ क्षेत्र बनाएँ. ट्यूब या कुप्पी में पिपेट में मीडिया बांटना. नमूने के प्रवाह को नियंत्रित तो इसे बाहर की ट्यूब या कुप्पी छप नहीं करता है. वॉल्यूम ऐसी है कि पूरी मात्रा को जन्म दिया है और विंदुक पूरी तरह से नालियों, या एक विशिष्ट मात्रा वितरण बिंदु से बिंदु (एक मात्रा के लिए अंकन) कर रही द्वारा हासिल की है मापा जा सकता है. लेम्प जला के माध्यम से ट्यूब या कुप्पी की रिम पासएर लौ एक बार फिर, तो टोपी की जगह. ट्यूब या कुप्पी अलग निर्धारित करें. विंदुक सहायता निकालें, और उचित बर्बाद गोदाम में पिपेट त्यागें. प्लास्टिक सीरम वैज्ञानिक pipettes प्रयोज्य हैं, है कांच सीरम वैज्ञानिक pipettes जबकि किया जा सकता है और निष्फल इस्तेमाल किया फिर से. उचित निपटान की आवश्यकता है प्लास्टिक pipettes एक नामित sharps कंटेनर (कठोर प्लास्टिक निपटान बैग के साथ पंक्तिवाला बॉक्स) में रखा जा सकता है जबकि कांच pipettes शुरू में 10% ब्लीच समाधान के लिए अंदर और बाहर सतहों कीटाणुरहित के साथ एक कंटेनर में डूब जाना चाहिए. तो कांच pipettes प्रयोगशाला डिटर्जेंट के साथ अच्छी तरह से धोया जाना चाहिए, आसुत जल से धोए, और एक autoclave में निष्फल है. ये एक ही कदम जब एक जीवाणु संस्कृति या फेज स्टॉक के साथ मीडिया inoculating या जब धारावाहिक dilutions के प्रदर्शन का पालन किया जाना चाहिए. 3. स्थानांतरण Micropipettors का उपयोग तरल पदार्थ संक्षेप मापने और मिनट संस्करणों वितरण accompli हो सकता हैशेड का उपयोग micropipettors (पैनल, चित्रा 6 भी Pipetman के रूप में जाना जाता है). 0.2-2 μl, 1-10 μl के लिए P10 के लिए P2, 2-20 μl के लिए P20 के लिए 20-200 μl, और 200-1000 μl के लिए P1000, P200: इन उपकरणों प्रत्येक एक विशिष्ट मात्रा सीमा के साथ विभिन्न आकारों में आते हैं. देखभाल के साथ micropipettors समझो, के रूप में वे सटीक उपकरणों. उन्हें प्रयोगशाला बेंच पर नायाब झूठ बोल रही है, जहां वे गिर जा सकता है और क्षतिग्रस्त मत छोड़ो. Pipettes संक्षारक रसायनों के साथ संपर्क में आने के लिए अनुमति न दें. 1000 μl से अधिक संस्करणों के लिए, एक सीरम वैज्ञानिक विंदुक का उपयोग करें. हालांकि Bunsen बर्नर के द्वारा बनाई गई बाँझ क्षेत्र के भीतर काम कर, लौ micropipettors, ट्यूब और प्लास्टिक सुझावों नहीं है. ट्यूबों और सुझावों पूर्व निष्फल होना चाहिए. micropipettors एक पूर्व सिक्त निस्संक्रामक के साथ नीचे साफ हो सकता है पहले पोंछ उपयोग करने के लिए. सांख्यिक तिरस्कृत मात्रा दिखा आयतनमिति समायोजन घुंडी बदल कर सेट किया जा सकता है. Adjus# 3 कदम आगे बढ़ने से पहले मात्रा. कभी इरादा सीमा से ऊपर समायोजन घुंडी बारी! अधिकतम सटीकता प्राप्त करने के लिये जब micropipettor पर मात्रा सेटिंग कम है, धीरे धीरे नीचे अंगूठे पहिया डायल, स्नातक स्तर की पढ़ाई के निशान overshoot नहीं यकीन कर रही है. अधिकतम सटीकता प्राप्त जब micropipettor पर मात्रा सेटिंग में वृद्धि, अंगूठे का पहिया डायल अप, 1/3 एक मोड़ के द्वारा वांछित स्नातक स्तर की पढ़ाई के निशान पारित. फिर धीरे धीरे नीचे अंगूठे पहिया डायल करने के लिए इच्छित मात्रा तक पहुँचने, सुनिश्चित करें कि स्नातक स्तर की पढ़ाई के निशान overshoot नहीं बना. आयतनमिति तीन नंबर से पता चलता है. Micropipettor पर निर्भर करता है, संख्या अलग तरह से व्याख्या कर रहे हैं. ध्यान दें कि प्रत्येक micropipettor केवल छोटी स्नातक स्तर की पढ़ाई के निशान के रूप में सही है. P2: μl 0.2-2.0 के बीच संस्करणों के लिए. शीर्ष संख्या microliters में मात्रा को दर्शाता है. दूसरी संख्या indicat केmicroliter के तों दसवां (0.1 μl), और तीसरे नंबर microliter (0.01 μl) के hundredths का प्रतिनिधित्व करता है. प्रत्येक स्नातक निशान में microliter के एक हजारवें (0.002 μl) की एक वेतन वृद्धि के बराबर होती है. P10: μl 1.0-10.0 के बीच संस्करणों के लिए. शीर्ष संख्या microliters की दसियों के लिए है, यह आमतौर पर "0" सेट है और केवल पर "1" "0" पर सेट जब 10.0 μl वितरण के अन्य दो संख्या के साथ सेट किया जाना चाहिए. मध्य संख्या microliters में मात्रा को दर्शाता है. तीसरे नंबर दसवां एक microliter की में (0.1 μl) इंगित करता है. प्रत्येक स्नातक निशान में microliter के एक शतांश (0.02 μl) की एक वेतन वृद्धि के बराबर होती है. P20: μl 2.0-20.0 के बीच संस्करणों के लिए. काला में शीर्ष संख्या microliters की दसियों के लिए है, यह केवल अन्य दो नंबरों को "0" पर सेट जब 20.0 μl वितरण के साथ में "2" सेट किया जाना है. काले रंग में दूसरे नंबर microliters में मात्रा को दर्शाता है. लाल रंग में तीसरे नंबर दस इंगित करता हैएक microliter (0.1 μl) ths. प्रत्येक स्नातक निशान में microliter के एक शतांश (0.02 μl) की एक वेतन वृद्धि के बराबर होती है. P200: 20.0-200 μl के बीच संस्करणों के लिए. शीर्ष संख्या सैकड़ों microliters के लिए है, यह केवल दो अन्य संख्या के साथ "0" पर सेट जब 200 μl वितरण में "2" सेट किया जाना है. मध्य संख्या microliters के दसियों में तिरस्कृत मात्रा इंगित करता है, और तीसरे नंबर पर microliters में मात्रा को दर्शाता है. प्रत्येक स्नातक निशान में microliter के दो दसवां अंश (0.2 μl) की एक वेतन वृद्धि के बराबर होती है. P1000: μl 200-1000 के बीच संस्करणों के लिए. शीर्ष संख्या microliters के हजारों के लिए है, यह आमतौर पर "0" सेट है और केवल पर "1" "0" पर सेट जब 1000 μl वितरण के अन्य दो नंबर के साथ सेट किया जाना चाहिए. मध्य संख्या सैकड़ों microliters के लिए है. नीचे संख्या microliters की दसियों के लिए है. प्रत्येक स्नातक निशान में दो microliters के (2 μl) की एक वेतन वृद्धि के बराबर होती है. प्रदर्शन की जाँच करें: इन उपकरणों सालाना calibrated किया जा चाहिए, सटीकता और शुद्धता सुनिश्चित करने के विनिर्देशों के ± 5% के भीतर रहने के लिए रखा जाता है. एक विश्लेषणात्मक पानी को मापने के पैमाने का उपयोग करने के लिए, सुनिश्चित करें कि न्यूनतम और अधिकतम सेटिंग्स को इच्छित मात्रा के अनुरूप बना है. उदाहरण के लिए, स्थानान्तरण करने के लिए पैमाने पर तौलना पकवान P1000 पानी की 200 μl का उपयोग करें. चूंकि पानी 1 के एक घनत्व है, तो पानी की 1 मिलीग्राम 1 ग्राम (छ) के बराबर है. इस प्रकार, पानी की 200 μl (0.2 मिलीग्राम) 0.2 जी बराबर होना चाहिए. इसके अलावा, यकीन है कि टिप और रिसाव नहीं कर सकते हैं बनाए रखने के वांछित मात्रा तक सवार प्रणाली का उपयोग तिरस्कृत करते हैं. Micropipettors प्लास्टिक डिस्पोजेबल सुझावों के साथ हर समय किया जाना चाहिए. Micropipettor की नली के अंत पर एक टिप कसकर फिट. नीचे प्रेस और थोड़ा मोड़ करने के लिए एक airtight सील सुनिश्चित. युक्तियाँ आमतौर पर प्लास्टिक बक्से कि वाष्पदावी विसंक्रण द्वारा निष्फल किया जा सकता है में पैक कर रहे हैं. टिप बॉक्स खोलने के लिए एक टिप को पुनः प्राप्त, तो टिप बॉक्स बंद करने के लिए हवा में contaminants के साथ संपर्क को कम. कुछ सुझावों सीरम वैज्ञानिक pipettes पर रूई प्लग करने के लिए समान फिल्टर है. इन सुझावों को अक्सर नियमित सुझावों से और अधिक महंगा है और इस प्रकार विशिष्ट अनुप्रयोगों के लिए उपयोग किया जाता है. उदाहरण के लिए, जब क्लोरोफॉर्म या 32 डीएनए पी लेबल के रूप में रेडियोधर्मी तरल पदार्थ, जैसे अस्थिर रसायन फिल्टर सुझावों का उपयोग को मापने के दूषित हो रही है से micropipettor की नली को रोकने में मदद करता है. एक ऊर्ध्वाधर स्थिति में micropipettor पकड़ो. Micropipettor रखते हुए ईमानदार अंदर चल रहा है और micropipettor की contaminating के बैरल से तरल पदार्थ को रोकने जाएगा. (1) आराम की स्थिति, (2) पहला पड़ाव है, और (3) दूसरा स्टॉप (चित्रा 6, पैनल बी): micropipettor तीन स्थानों है. साधन सवार दो बंद प्रणाली है. पहला पड़ाव दो कार्य किया है. पहले टिप whe में तरल की वांछित मात्रा में आकर्षित करने के लिए हैn पहला पड़ाव से आराम स्थिति में सवार जारी. दूसरा कार्य करने के लिए तरल की टिप से बहुमत बांटना जब आराम की स्थिति से पहले रोकने के लिए सवार निराशाजनक है. इसके अलावा दूसरे रोक dispenses तरल जो कुछ टिप में रहता है के लिए सवार निराशाजनक. आराम की स्थिति से पहले रोकने के लिए सवार पर pushbutton दबाना. सेटिंग की मात्रा के बराबर हवा विस्थापित किया जाएगा. तरल में टिप को विसर्जित कर दिया, जबकि नीचे पकड़े पहला पड़ाव pushbutton. बोतलें, ट्यूब और बोतल के पक्षों को छूने नहीं micropipettor ही, अन्यथा इन जहाजों के अंदर सतहों दूषित हो जाएगा. ही सुझावों बाँझ कर रहे हैं. धीरे धीरे रिलीज pushbutton टिप में तरल महाप्राण (व्यंजन). बंद करो एक बार pushbutton आराम की स्थिति में वापस आ गया है. एक क्षण प्रतीक्षा करें तो तरल टिप में खींचा जा सकता है. टिप में तरल पदार्थ की मात्रा मात्रा ओ बराबर होगामें च micropipettor की सेटिंग. उन युक्त ग्लिसरॉल जैसे चिपचिपा तरल पदार्थ टिप में प्रवेश करने के लिए और अधिक समय की आवश्यकता है. तरल से टिप निकालें, और नेत्रहीन टिप का निरीक्षण करने के लिए की पुष्टि के लिए कि तैयार तरल टिप में अपेक्षित स्तर तक पहुँच गया है और वहाँ टिप में कोई हवाई बुलबुले हैं. यदि आवश्यक हो, तरल निष्कासित और मैन्युअल micropipettor पर सुझावों कस. तरल ड्रा और फिर से जाँच करें. तरल प्राप्त ट्यूब की दीवार (10 ° से 45 °) के खिलाफ एक कोण पर टिप प्लेस. तरल निष्कासित, धीरे से पहले रोकने के लिए सवार पर pushbutton दबाना. एक पल रुको, तो दूसरे को रोकने के लिए pushbutton प्रेस करने के लिए टिप में कोई अवशिष्ट तरल निष्कासित. सवार भी जल्दी से निराशाजनक है तरल छींटे या होगा उत्पादन ट्यूब में अवांछनीय बुलबुले निष्कासित कर दिया जा रहा है कारण हो सकता है. आराम की स्थिति में सवार जारी करने से पहले कर रहे हैं,तरल से टिप ले जाएँ. नामित sharps बर्बाद कंटेनर में micropipettor पर इंजेक्शन बटन दबाकर सुझावों त्यागें. 4. कार्य अंतरिक्ष क्लीनिंग जब एक सड़न रोकनेवाला तकनीक के उपयोग की आवश्यकता के साथ प्रयोग समाप्त, Bunsen बर्नर बारी है, तो दूर सब आपूर्ति और अभिकर्मकों डाल दिया. Labware (बोतलें, micropipettors,,, पिपेट टिप बक्से) के एक पूर्व सिक्त निस्संक्रामक के साथ बाहर सतहों पोंछे पोछो contaminants के भंडारण स्थान के लिए स्थानांतरित नहीं कर रहे हैं करने के लिए सुनिश्चित करें. जगह उचित निपटान गोदाम में कांच के बने पदार्थ और खतरनाक अपशिष्ट पदार्थों को दूषित. प्रयोगशाला बेकार labware दस्ताने, pipettes, टिप्स, और ट्यूबों के रूप में शामिल है. गैर संक्रामक खतरनाक अपशिष्ट जब गैर रोगजनक जीवों (बीएसएल-1) के साथ प्रयोग कर उत्पन्न होता है, जबकि संक्रामक खतरनाक अपशिष्ट जब रोगजनक जीवों (बीएसएल-2 या इसके बाद के संस्करण) का उपयोग कर उत्पन्न होता है. संक्रामक अपशिष्ट autoclaved या कीटाणुरहित befor होना चाहिए हैई इसे खारिज कर दिया है. प्रयोगशाला सुरक्षा BMBL (5 वें एड.) में OSHA और संस्थागत पर्यावरणीय स्वास्थ्य और सुरक्षा विभागों द्वारा प्रदान की उन के रूप में वर्णित के रूप में अच्छी तरह से दिशा निर्देशों का पालन करें. प्रयोगशाला बेंच पर साथ पूरे कार्य क्षेत्र पोछो पूर्व सिक्त निस्संक्रामक कनस्तर से मिटा, एक बार फिर से लुप्त हो जाना निस्संक्रामक के लिए अनुमति देता है. हाथ अच्छी तरह से प्रयोगशाला छोड़ने से पहले एंटीसेप्टिक साबुन और गर्म पानी से धो लें. 5. प्रतिनिधि परिणाम सीरम वैज्ञानिक pipettes का उपयोग करने के लिए तरल पदार्थ को हस्तांतरण करने के लिए एक नमूना आवेदन 7 चित्र में दिखाया गया है. ये pipettes अक्सर सूक्ष्म जीव विज्ञान प्रयोगशाला में उपयोग किया जाता है बैक्टीरियल संस्कृतियों के साथ टीका के लिए मीडिया को तैयार है. उदाहरण के लिए, बाँझ बोतल पहले संस्कृति शोरबा की एक निर्दिष्ट मात्रा के साथ में भर रहे हैं, इस मामले में Luria रसा (पौंड), फिर कोशिकाओं की एक छोटी संख्या (जैसे कि ई. कोलाई) मीडिया को जोड़ रहे हैं. एक सीरम पी का प्रयोगipette, पहले शोरबा aseptically कुप्पी के लिए किया जाना चाहिए मीडिया बोतल से स्थानांतरित. इस मामले में, पौंड की 25 मिलीलीटर की एक 125 मिलीलीटर बाँझ फ्लास्क का उपयोग कर एक 25 मिलीलीटर सीरम वैज्ञानिक विंदुक के लिए जोड़ा गया है. अगला, शोरबा ई. साथ inoculated किया जाना चाहिए कोलाई कोशिकाओं. यहाँ, कक्षों की 10 μl aseptically हस्तांतरित किया गया था एक पहले से बढ़ रही संस्कृति कुप्पी से ताजा पौंड की 25 मिलीलीटर एक P20 micropipettor के का उपयोग कर. कुप्पी समय की एक विशेष राशि के लिए एक विकास कक्ष में incubated है, कोशिकाओं (इस उदाहरण के लिए, ई. कोलाई कोशिकाओं रातोंरात 37 डिग्री सेल्सियस पर एक मिलाते हुए मंच पर incubated रहे थे) को दोहराने के लिए अनुमति देता है. परिणाम एक परेशान बैक्टीरियल सेल संस्कृति है कि बाद के प्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. सीरम विज्ञानी pipettes भी मूल रूप से टेस्ट ट्यूब को एक बोतल में आपूर्ति मीडिया हस्तांतरण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, या परीक्षण नलियों के बीच, के रूप में जब एक जीवाणु संस्कृति की dilutions के किया जाता है. अगर सड़न रोकनेवाला तकनीक मीडिया जोड़तोड़ की इन प्रकार के दौरान बनाए रखा नहीं है , तो संस्कृतियों हो जाएगा दूषित है, और बाद में उन संस्कृतियों का उपयोग कर प्रयोगों क्योंकि ताजा, पवित्र संस्कृतियों के लिए तैयार करने की आवश्यकता होगी देरी हो जाएगा. त्रुटि होती है क्योंकि प्रक्रिया के दौरान एक बाँझ क्षेत्र बनाए रखा नहीं है. उदाहरण के लिए, आप के लिए प्रयोगशाला बेंच या एक संस्कृति बोतल या ट्यूब के रिम लौ कीटाणुरहित भूल सकता है. विंदुक के टिप को छूने या एक बोतल या इसे अपने हाथ में पकड़ के बजाय पीठ पर टेस्ट ट्यूब की टोपी निर्धारित कर सकते हैं. उचित प्रक्रिया एक न्यूनतम करने के लिए मीडिया और संस्कृतियों के संक्रमण रखने के लिए महत्वपूर्ण है चित्रा 8A. ई. का शुद्ध बनाम दूषित संस्कृति का एक उदाहरण प्रदान करता है एक पौंड की 5 मिलीलीटर युक्त ट्यूब में कोली. बाईं पैनल वर्दी ठीक एक शुद्ध ई. के ठेठ मैलापन प्रदर्शित संस्कृति से पता चलता है कोलाई संस्कृति. इसके विपरीत, सही पैनल में जो विकास विशेषताओं की इस बैक्टीरिया के तनाव के लिए उम्मीद उन से विचलित एक दूषित संस्कृति को दर्शाता है. "> तकनीकी त्रुटियों जब सीरम वैज्ञानिक परीक्षण नलियों के बीच मीडिया की गलत मात्रा के हस्तांतरण में जिसके परिणामस्वरूप pipettes जोड़ तोड़ होते हैं उदाहरण के लिए, आप को गलत ढंग से विंदुक पर मात्रा को पढ़ने के (यानी, बनाम meniscus के ऊपर और नीचे) या हो सकता है आप मीडिया को निष्कासित कर सकते हैं. टीडी पिपेट, जो नहीं दिया जा टिप में एक छोटा सा छोड़ करने के लिए डिजाइन किया गया था. से पूरी तरह से जब एक बिंदु से बिंदु वितरण मीडिया की, तुम गलत अंशांकन अंक का उपयोग करें और गलत मात्रा बांटना प्रदर्शन चित्रा 8B. पता चलता है मीडिया की सही बनाम गलत संस्करणों के साथ टेस्ट ट्यूब का एक उदाहरण बाईं तरफ ट्यूब 5 मिलीलीटर सीरम वैज्ञानिक विंदुक के साथ मापा पौंड की 3.5 मिलीग्राम शामिल हैं. छात्र मीडिया के एक बिंदु से बिंदु वितरण में जो लेग तैयार किया गया था का आयोजन किया 5.0 मिलीग्राम स्नातक चिह्नित करने के लिए और 1.5 मिलीलीटर निशान तिरस्कृत. सही पर ट्यूब पौंड की 2.5 मिलीलीटर ही आकार के एक विंदुक के साथ मापा होता है क्योंकि मैं छात्र जो मीडिया के बिंदु से बिंदु वितरण कियाncorrectly यह 5.0 मिलीलीटर निशान से 2.5 मिलीग्राम निशान तिरस्कृत. इस गलती है कि एक उच्च एकाग्रता से की योजना बनाई होगा एक जीवाणु संस्कृति में, बाद में dilutions के गलत होने के कारण होगा. त्रुटियों का यह प्रचार कि सही सेल सांद्रता के साथ दोहराया करने की आवश्यकता होगी एक असफल प्रयोग में परिणाम कर सकते हैं. Micropipettors का उपयोग करने के लिए तरल पदार्थ स्थानान्तरण के लिए एक नमूना आवेदन 9 चित्र में दिखाया गया है. ये pipettors प्रयोगों की एक किस्म के लिए आणविक जीव विज्ञान और सूक्ष्म जीव विज्ञान में पीसीआर और जेल वैद्युतकणसंचलन के लिए नमूने की तैयारी या बैक्टीरियल कोशिकाओं या फेज कणों की छोटी मात्रा में (कम से कम 1.0 मिलीग्राम) के साथ बाँझ मीडिया या बफर inoculating सहित उपयोग किया जाता है. दिए गए उदाहरण में, छात्र एक 1.8 मिलीग्राम microcentrifuge ट्यूब में ते बफर के 12.5 μl का तबादला (पैनल में छोड़ दिया ट्यूब, ध्यान दें कि डाई बफर करने के लिए जोड़ा गया है स्पष्ट microcentrifuge ट्यूब के अंदर तरल के दृश्य की सुविधा).यह प्रक्रिया छात्र को सही micropipettor चयन के पहले, इस मामले में एक P20, और अगले करने के लिए सही मात्रा (पैनल बी) आयतनमिति सेट की आवश्यकता है. एक टिप इस्तेमाल किया गया था कि अंत में एक रूई के प्लग करने के लिए संभव संदूषण कि टिप में बफर नमूना तक पहुँचने से micropipettor की नली से निष्कासित कर दिया जा सकता है को रोकने के शामिल हैं. अगर ध्यान जब सुझावों में तरल पदार्थ aspirating, धीरे धीरे इतना तरल pipettor बैरल में छप नहीं करता सवार निराशाजनक लिया जाता है यह एहतियात आवश्यक नहीं है. तकनीकी त्रुटियों गलत संस्करणों के हस्तांतरण में है कि परिणाम हो सकता है. उदाहरण के लिए, आप काम के लिए गलत micropipettor चयन या सही micropipettor पर एक गलत मात्रा आयतनमिति सेट कर सकते हैं. बफर में डुबो टिप से पहले, आप पिछले पहला पड़ाव सवार धक्का, टिप में तैयार किया जा सकता है जब सवार जारी बफर की एक अतिरिक्त के कारण हो सकता है. वैकल्पिक रूप से, आप बफर में टिप काफी दूर तक नहीं विसर्जित कर सकता है, तो हवा खींचा जाता हैबफर के बजाय टिप में. तुम दूसरे को रोकने के लिए सवार धक्का जब microcentrifuge सिरे से जारी किया वांछित मात्रा से कम के कारण ट्यूब में बफर वितरण भूल सकता है. पैनल में सही ट्यूब 9 चित्रा की एक microcentrifuge बाईं तरफ के ट्यूब के सापेक्ष बफर की गलत मात्रा युक्त ट्यूब से पता चलता है. बफर के 12.5 μl वितरण करने के बजाय, छात्र 125 μl तिरस्कृत. बफर के एक काफी बड़ी मात्रा के वितरण में जिसके परिणामस्वरूप, इस मामले में, हालांकि संख्या समान आयतनमिति के पर स्थापित कर रहे हैं, गलत micropipettor (पैनल बी छात्र P20 एक के बजाय P200 इस्तेमाल किया) काम के लिए चुना गया था. यदि यह समाधान के लिए पीसीआर के रूप में एक आवेदन के लिए अभिकर्मकों के एक मिश्रण तैयार किया जा रहा है इस्तेमाल किया गया था, तो इस गलती को बाद में एक ही ट्यूब जोड़ी अभिकर्मकों के अंतिम एकाग्रता बदल जाएगा. नतीजतन, यह संभावना नहीं है कि प्रयोग सफल होगा आणविक जीव विज्ञान ऐसे प्रक्रियाओं के बाद से,के रूप में पीसीआर प्रतिक्रिया ठीक से काम करने के लिए विशिष्ट मात्रा में होना करने के लिए सभी घटकों की आवश्यकता होती है. क्योंकि यह हमेशा micropipettors (विशेष रूप से प्रति बैरल के अंदर) बाँझ हैं सुनिश्चित करने के लिए संभव नहीं है, स्टॉक समाधान भी निवारण असफल जब प्रयोगों प्रदर्शन करने के प्रयासों के कारण दूषित हो सकता है. Micropipettors का उपयोग करने के लिए बाँझ समाधान हस्तांतरण अगर, यह पुरजोर सिफारिश की है कि स्टॉक के समाधान के aliquots (मीडिया, बफर, पानी) सीरम वैज्ञानिक pipettes साथ सड़न रोकनेवाला तकनीक का उपयोग किया जा. यह 15 मिलीग्राम या 50 मिलीलीटर बाँझ चोटीदार ट्यूबों में स्टॉक समाधान काम बनाए रखने के लिए आम है. ये अक्सर जबकि एक micropipettor ऑपरेटिंग हेरफेर करने के लिए आसान कर रहे हैं और स्टॉक समाधान की एक ताजा अशेष भाजक के साथ प्रतिस्थापित किया जा सकता अगर मात्रा स्थानान्तरण के दौरान दूषित. चित्रा 1 बाँझ Bunsen बर्नर लौ की updraft द्वारा बनाया क्षेत्र. न्यूनतमबाँझ समाधान और संस्कृतियों के संक्रमण imize, यह महत्वपूर्ण है कि सभी जोड़तोड़ बाँझ क्षेत्र के भीतर आयोजित किया जाना है. कांच संस्कृति ट्यूबों और बोतल की रिम्स नीले कोन, लौ का सबसे भाग के टिप के माध्यम से पारित किया जाना चाहिए. प्लास्टिक ट्यूबों और सुझावों flamed है नहीं किया जा सकता है – इन वैकल्पिक उपयोग करने के लिए पूर्व तरीकों से किया जाना चाहिए पूर्व निष्फल. चित्रा 2. सीरम विज्ञानी pipettes तरल पदार्थ अपूतित हस्तांतरण के लिए प्रयोग किया जाता है. (ए) बाएँ से दिखाया गया करने के लिए सही के चित्र 25 मिलीलीटर, 10 मिलीलीटर, और 5 मिलीग्राम pipettes हैं. (बी) सीरम विज्ञानी pipettes प्लास्टिक या कांच हो सकता है. प्लास्टिक pipettes प्रयोज्य (एक समय का उपयोग करें) और आम तौर पर अलग – अलग कागज और प्लास्टिक की आस्तीन में जो सभी के अंदर सतहों बाँझ (बाईं ओर) में लिपटे रहे हैं. ग्लास pipettes इस्तेमाल किया जा कई बार वे साफ कर रहे हैं का उपयोग करता है के बीच निष्फल प्रदान कर सकते हैं, इन आमतौर पर धातु कनस्तरों में जमा हो जाती है (सही) की ओर. चित्रा 3 सीरम विज्ञानी pipettes दो प्रकार के हैं: टीसी ("शामिल") या टीडी ("देने"). दिखाया एक टीडी 5 मिलीलीटर पिपेट की व्याख्यात्मक लेबल है. 4 चित्रा सड़न रोकनेवाला तकनीक. जब एक बोतल, फ्लास्क, या टोपी के साथ ट्यूब से तरल पदार्थ aspirating जगह है, कभी बेंच पर टोपी. इसके बजाय, एक ही हाथ में टोपी पकड़ विंदुक सहायता के रूप में सामने हाथ के साथ तरल के रूप में दिखाया युक्त पोत से छेड़छाड़ करते हैं. चित्रा 5. Meniscus बनते हैं जब सीरम वैज्ञानिक पिपेट में तरल ड्राइंग. यह मात्रा विंदुक जहां meniscus के नीचे संरेखित पर स्नातक स्तर की पढ़ाई के निशान से मेल खाती है. इस उदाहरण में, meniscus के 2.5 मिलीग्राम स्नातक के साथ aligns tion के निशान. चित्रा 6 एकल चैनल micropipettor के है. (क) से पता चला एक प्लास्टिक बैरल टिप धारक के नीचे करने के लिए संलग्न टिप के साथ एक नमूना micropipettor है. संकेत दिया आयतनमिति के स्थानों रहे हैं, आयतनमिति सेटिंग बदलने के लिए अंगूठे का पहिया, बैरल धारक टिप, टिप बेदखलदार बटन, और सवार के लिए pushbutton. (बी) एक micropipettor पर सवार प्रणाली दो बंद. 7 चित्रा सीरम वैज्ञानिक pipettes का उपयोग बाँझ 125 मिलीलीटर की बोतल में मीडिया को हस्तांतरण. छोड़ दिया कुप्पी केवल मीडिया (पौंड) के 25 मिलीलीटर है, जबकि सही कुप्पी ई. की एक संस्कृति है कोशिकाओं तो रातोंरात incubating के साथ 37 पर लेग inoculating से उत्पन्न कोलाई डिग्री सेल्सियस नोट: कैसे सही पर कुप्पी में मीडिया सेल के विकास के कारण परेशान है. ई 8 "=" / "files/ftp_upload/2754/2754fig8.jpg /> संख्या 8 सीरम वैज्ञानिक pipettes बाँझ परीक्षण नलियों में मीडिया को हस्तांतरण. (ए) बाएँ ट्यूब एक शुद्ध ई. के 5 मिलीग्राम शामिल कोलाई संस्कृति है, जबकि सही ट्यूब एक दूषित जीवाणु सेल संस्कृति के 5 मिलीग्राम शामिल हैं. दो संस्कृतियों के बीच विकास विशेषताओं में अंतर नोट करें. हालांकि दोनों को परेशान कर रहे हैं, सही पर संस्कृति एक कवक या अन्य हवाई सूक्ष्मजीवों संस्कृति एक अलग रंग और ई. के लिए उम्मीद से है कि स्थिरता देने के साथ दूषित हुआ है कोलाई कोशिकाओं. (बी) के बाईं संस्कृति ट्यूब 3.5 मिलीग्राम लेग शामिल है, जबकि सही ट्यूब केवल 2.5 मिलीग्राम लेग शामिल हैं. यह मात्रा अंतर मीडिया के एक बिंदु से बिंदु ट्यूबों के लिए वितरण का आयोजन करते समय गलती से हुई. 9 चित्रा usin.जी micropipettors को बाँझ microcentrifuge ट्यूबों में बफर हस्तांतरण करने के लिए. (ए) बाईं microcentrifuge ट्यूब ते बफर 12.5 केवल μl शामिल है, जबकि सही ट्यूब 125 μl शामिल हैं. ध्यान दें कि एक रंग बफर करने के लिए जोड़ा गया है स्पष्ट microcentrifuge ट्यूब के अंदर तरल के दृश्य की सुविधा है. (बी) छोड़ दिया आयतनमिति एक P20 micropipettor से है, जबकि सही आयतनमिति के एक P200 micropipettor से है. एक आम गलती गलत micropipettor चयन है. हालांकि संख्या के समान P20 और P200 आयतनमिति, गलत संस्करणों के हस्तांतरण में गलत micropipettor के परिणामों के चयन पर सेट कर रहे हैं. 10 चित्रा लामिना प्रवाह समाधान और संस्कृतियों के संक्रमण को रोकने के लिए किया हुड. दिखाया एक जैव सुरक्षा के बीएसएल-2 जीवों के साथ काम करने के लिए अनुमोदित कैबिनेट है.

Discussion

सड़न रोकनेवाला तकनीक नियमित प्रयोगशाला में अवांछित सूक्ष्मजीवों द्वारा दूषित बनने से बाँझ समाधान और संस्कृतियों को रोकने के लिए किया प्रक्रियाओं का एक सेट करने के लिए संदर्भित करता है. इस तरह की तकनीक प्रयोगों है कि बढ़ कोशिकाओं की आवश्यकता के लिए आवश्यक हैं. हालांकि एक काम की स्थापना है कि पूरी तरह से बाँझ है हासिल नहीं किया जा सकता है, जैसे प्रक्रियाओं disinfecting के प्रयोगशाला सतहों, एक बाँझ क्षेत्र बनाने के एक लेम्प बर्नर का उपयोग कर, हवा uncapped संस्कृतियों और मीडिया के जोखिम को सीमित करने, बोतलें, ट्यूब और गिलास pipettes जैसे सामग्री स्टरलाइज़, और बाँझ उपकरणों की गैर बाँझ सतहों के साथ संपर्क से बचने के एक प्रयोग में contaminating के समाधान और संस्कृतियों की संभावना को कम कर देता है. इन एहतियाती दूसरी प्रकृति हो प्रक्रियाओं के लिए लक्ष्य है, यह प्रशिक्षण और अभ्यास के साथ आता है, जबकि एक प्रयोगशाला में काम कर रहे है.

बाँझ समाधान और संस्कृतियों सीरम वैज्ञानिक pipettes और mic के रूप में इस तरह के उपकरणों का उपयोग कर के साथ मात्रा स्थानान्तरणropipettors एक प्रयोगशाला में किए गए नियमित तकनीक के कई प्रकार के हैं. विभिन्न प्रयोगात्मक अनुप्रयोगों अलग, अभी तक सटीक और सही मात्रा में स्थानांतरित करने में सक्षम उपकरणों के लिए कहते हैं. सीरम वैज्ञानिक pipettes सूक्ष्म जीव विज्ञान प्रयोगशालाओं में इस्तेमाल किया जाता है मीडिया मिली लीटर संस्करणों को शामिल तैयारी की आवश्यकता के लिए सेल संस्कृतियों को तैयार करने के लिए, जबकि micropipettors आणविक जीव विज्ञान के प्रयोगों है कि केवल समाधान के microliter मात्रा की जरूरत के लिए आवश्यक हैं. सड़न रोकनेवाला तकनीक इन उपकरणों के साथ अभ्यास है, संदूषण मात्रा स्थानान्तरण के दौरान कम से कम है तरल या प्रयोग के प्रकार की राशि की परवाह किए बिना.

इस प्रोटोकॉल में चर्चा की, हालांकि नहीं एक दूसरे का मतलब है सामान्यतः करने के लिए संक्रमण को रोकने के लिए किया लामिना का प्रवाह हुड (10 चित्रा) के भीतर काम है. इस उपकरण के ऊतक संस्कृति और BLS 2 या अधिक के रूप में वर्गीकृत सूक्ष्मजीवों के साथ प्रदर्शन प्रयोगों के लिए महत्वपूर्ण है. एक लामिना का प्रवाह हुड एक HEPA (उच्च दक्षताकण हवा फिल्टर) है कि हुड में बह रही है, जबकि कमरे से कार्यस्थान permeating से अनफ़िल्टर्ड हवा को रोकने के हवा से हवाई contaminants हटा. ध्यान से, एक Bunsen बर्नर एक लामिना का प्रवाह हुड के अंदर प्रयोग नहीं किया क्योंकि लौ गर्मी से हवा का प्रवाह बाधित हुड की कार्यक्षमता के लिए आवश्यक कर सकते हैं.

यह अक्सर जब प्रयोगों प्रदर्शन करने के लिए अपने सड़न रोकनेवाला तकनीक की गुणवत्ता की जांच सहायक है. समाधान की पुष्टि करें और संस्कृति मीडिया प्रयोगात्मक जोड़तोड़ के दौरान दूषित नहीं करते हैं, हमेशा एक नकारात्मक नियंत्रण तैयार है. उदाहरण के लिए, अगर बैक्टीरियल संस्कृतियों के विकास के लिए शोरबा की ट्यूब की तैयारी, एक ट्यूब केवल बाँझ मीडिया को छोड़ने नहीं टीका लगाना नहीं है. टीका ट्यूबों के साथ – साथ उसके निरीक्षण uninoculated अवांछित अनजाने ट्यूब में शुरू की कोशिकाओं की वृद्धि से गंदगी के रूप में संक्रमण के लक्षण के लिए नियंत्रण ट्यूब मध्यम सेते हैं. यदि नियंत्रण ट्यूब दूषित है, प्रयोगात्मक ट्यूबसंभावना है के रूप में अच्छी तरह से दूषित कर रहे हैं, और प्रयोग करने के लिए दोहराया जा करना होगा. इन एहतियाती उपाय हर प्रयोग के साथ किया जाना चाहिए.

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments
LB Broth	Difco	244620	Recipe also available in reference 6
TE Buffer:
EDTA disodium salt dihydrate	Sigma	E5134
Trizma-HCl	Sigma	T-3253
CiDecon	Decon Laboratories, Inc.	8504	Disinfectant
Ethanol	Fisher Scientific	A406	For use as disinfectant, prepare 70%(v/v) with distilled water