Trichuris Muris Infecção: Um Modelo de imunidade do tipo 2 e inflamação no intestino
Summary
Trichuris Muris infecção intestinal é um modelo de imunidade Th2 onde os ratos resistentes ao gerar uma resposta protetora Th2 e camundongos suscetíveis de gerar uma resposta Th1 patológico.
Abstract
Trichuris Muris é um patógeno natural de ratos e é biologicamente e antigenicamente semelhante a espécies de Trichuris que infectam seres humanos e animais 1. Ovos infectantes são dadas por gavagem oral, escotilha no intestino delgado distal, invadem as células epiteliais intestinais (CIEM) que revestem as criptas do ceco e cólon proximal e sobre a maturação dos vermes liberam os ovos no ambiente 1. Este modelo é uma ferramenta poderosa para analisar os fatores que a ativação de células CD4 controle + T helper (Th), bem como alterações no epitélio intestinal. A resposta imune que ocorre em cepas resistentes puras, tais como C57BL / 6 e BALB / c, é caracterizada por citocinas Th2 polarizada (IL-4, IL-5 e IL-13) e expulsão de vermes enquanto Th1 associado citocinas (IL -12, IL-18, IFN-γ) promover infecções crônicas em AKR geneticamente suscetíveis / mice J 2-6. Citocinas Th2 promover mudanças fisiológicas no microambiente intestinal incluindo rotatividade de IECs, a diferenciação de células caliciformes, recrutamento e alterações na permeabilidade epitelial e contração do músculo liso, as quais têm sido implicados na expulsão verme 15/07. Aqui detalhamos um protocolo para a propagação de ovos de Trichuris Muris que pode ser usado em experimentos posteriores. Nós também fornecemos uma colheita de amostra experimental com sugestões para análise pós-infecção. Globalmente, este protocolo irá fornecer aos pesquisadores as ferramentas básicas para realizar uma Trichuris Muris modelo de infecção do mouse que podem ser utilizados para tratar questões relativas à propensão Th no trato gastrointestinal, bem como as funções efectoras imunes de IECs.
Protocol
Discussion
Este protocolo detalhes um alto padrão dose aguda Trichuris Muris infecção que pode ser modificado conforme exigido pelo investigador. Por exemplo, ratos podem ser sacrificados e os tecidos colhidas em dias diferentes. Para determinar que os ratos com sucesso estabelecida carga parasitária total que pode ser sacrificada no dia 14, altura em que todos os camundongos deve levar uma carga de aproximadamente 200 worms. Ratos também podem ser infectados por 32 dias, onde qualquer worm detectado terá atingido m…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (MSH-95368, 89773 e MOP-MOP-106623 para CZ) e da Fundação Canadense para a Inovação. SCM é o destinatário de uma Associação CIHR / canadense de Gastroenterologia pós-doutorado. CZ é um investigador CIHR Novo.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
|---|---|---|---|
| Animal Feeding Needles (18 x 1½”) | Popper | 7912 | |
| Smooth curved Forceps | Roboz | RS-5047 | |
| DMEM | Gibco | 11965 | |
| NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) | Jackson Laboratories | 005557 | These are the mice we used, however, any immunodeficient mice or susceptible strain should work. |
| RNAlater | Qiagen | 76104 | |
| 2 ml tubes | Axygen | MCT-200-C | |
| 15 ml tubes | Falcon | 352096 | |
| 6 well plates | Falcon | 353046 | |
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Science | 15710 | |
| α-RELMβ antibody | PeproTech Inc | 0694270Rb |
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