نقدم طريقة للمناعي لونين من الجذر الظهراني الأنسجة العقد التالي محواري إصابة. ويمكن استخدام النهج لتحديد مواقع محددة ملزمة عامل النسخ والتعديل اللاجينية الهامة هيستون والحمض النووي للتجديد المحاوير بجروح في كل من الجهاز العصبي المحيطي والمركزي.
Abstract
المحاوير في الجهاز العصبي المركزي (CNS) لا تجديد في حين أن أولئك في الجهاز العصبي المحيطي (PNS) لا تتجدد على نطاق محدود بعد الاصابه (تنغ وآخرون ، 2006). فمن المسلم به أن يتم تنشيط البرامج الترانسكربتي ضرورية لنمو وneurite محواري عند الاصابة في الجهاز العصبي المحيطي (Makwana وآخرون ، 2005). إلا أن الأدوات المتاحة لتحليل الخلايا العصبية في الجسم الحي تنظيم الجينات محدودة وصعبة في كثير من الأحيان.
في العقد الجذرية الظهرية (DRG) تقدم نموذجا ممتازا إصابة النظام لأن معصب كلا من الجهاز العصبي المركزي والجهاز العصبي المحيطي من محوار متشعبة مصدره سوما نفسه. والعقد يمثل مجموعة متميزة من الهيئات الخلية حيث تحدث عن الأحداث النسخي ، وبالتالي توفير منطقة محددة بوضوح من النشاط الترانسكربتي التي يمكن بسهولة وإزالته من بتكاثر الحيوانات. وينبغي أن إصابة الألياف العصبية في الجهاز العصبي المحيطي (مثل العصب الوركي) ، حيث تجدد المحاور لم يحدث ، تكشف عن وجود مجموعة من برامج النسخ التي تختلف عن تلك الاستجابة لاصابة مماثلة في الجهاز العصبي المركزي ، حيث التجديد لا يأخذ مكانه (الحبل الشوكي على سبيل المثال ). ويمكن وصف مواقع لعامل النسخ ملزمة ، وتعديل هيستون الحمض النووي الناجم عن إصابة الجهاز العصبي المركزي أو الجهاز العصبي المحيطي إما باستخدام لونين مناعي (رقاقة).
هنا ، نحن تصف بروتوكول الشذرة الثابتة باستخدام الأنسجة DRG الماوس التالية محواري إصابة. هذا المزيج يوفر وسيلة قوية لتحديد خصائص بيئة لونين المؤيدة للتجديد اللازمة لتعزيز تجدد المحاور.
Protocol
1. الوركي واصابة في العمود الظهري العصبية يتم وضع الحيوان على منشفة الجراحية وتحت عليه thermopad موجود في جميع أنحاء الإجراء الحفاظ على درجة حرارة الجسم من الماوس عند 37 درجة مئوية. جميع الحيوانات هي تخدير للجراحة مع إدارة ?…
Discussion
هذا البروتوكول يوفر طريقة مباشرة لنسأل عن البيئة خلال لونين محواري التجديد في الجهاز العصبي الكبار التالية محواري إصابة. اشتماله على نموذج إصابة DRG مع مناعي لونين للتحقيق في بيئة النسخي وجينية لاحقة للاصابة إما إلى الجهاز العصبي المحيطي أو الجهاز العصبي المركزي. ان?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نود أن نشكر اندريا تيديشي للمساعدة في تحديد التجارب الأولية الشذرة في المختبر ويندنر ريكو لمساهمته في تهذيب شروط الشذرة. وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة Hertie ؛ المنحة فورتشن ، جامعة توبنغن ، ومنح دي DFG 1497/1-1 (منح جميع لسيمون دي جيوفاني).
Floriddia, E., Nguyen, T., Di Giovanni, S. Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury. J. Vis. Exp. (53), e2803, doi:10.3791/2803 (2011).