Dimostriamo la metalation, purificazione e caratterizzazione di complessi di lantanidi. I complessi qui descritto può essere coniugato con macromolecole di attivare il rilevamento di queste molecole usando la risonanza magnetica.
Polyaminopolycarboxylate a base di leganti sono comunemente utilizzati per chelare ioni lantanidi, ed i complessi risultanti sono utili come agenti di contrasto per risonanza magnetica (MRI). Molti ligandi disponibili in commercio sono particolarmente utili perché contengono gruppi funzionali che consentono veloci, elevata purezza e ad alto rendimento coniugazione a macromolecole e biomolecole attraverso esteri attivati ammina-reattiva e gruppi isotiocianato o tiolo-reattiva maleimides. Mentre metalation di questi ligandi è considerato conoscenza comune nel campo della chimica bioconjugation, sottili differenze nelle procedure metalation devono essere presi in considerazione nella scelta dei materiali metallici di partenza. Inoltre, più opzioni per la purificazione e la caratterizzazione esistono, e la scelta della procedura più efficace dipende in parte dalla selezione delle materie prime. Queste sottili differenze sono spesso trascurati nei protocolli pubblicati. Qui, il nostro obiettivo è quello di dimostrare metodi comuni per metalation, purificazione e caratterizzazione di complessi di lantanidi, che possono essere usati come agenti di contrasto per risonanza magnetica (Figura 1). Ci aspettiamo che questa pubblicazione permetteranno agli scienziati biomedici di incorporare le reazioni di complessazione lantanidi nel loro repertorio di reazioni comunemente usate dai facilitando la selezione delle materie prime e metodi di purificazione.
Dato il numero crescente di pubblicazioni che includono lantanidi a base di agenti di contrasto 4-14, è importante che la cura nella preparazione, purificazione e caratterizzazione dei prodotti per garantire risultati riproducibili e comparabili. Questi complessi sono spesso considerati difficili da purificare e caratterizzare rispetto alle molecole organiche a causa della loro natura paramagnetica e la sensibilità di gruppi funzionali che potrebbero essere utilizzati per bioconjugation. Abbiamo descritto i…
The authors have nothing to disclose.
Noi riconosciamo con gratitudine fondi avvio da Wayne State University (MJA), una borsa di studio dalla Fondazione Americana per Aging Research (SMV), e un percorso di transizione Career Award Indipendenza (R00EB007129) dal National Institute of Biomedical Imaging e Bioingegneria del National Institutes della Sanità (MJA).
Reagents and Equipment | Company | Catalogue number |
---|---|---|
EuCl3•6H2O | Sigma-Aldrich | 203254-5G |
p-SCN-Bn-DTPA | Macrocyclics | B-305 |
ammonium hydroxide | EMD | AX1303-3 |
Spectra/Por Biotech Cellulose Ester (CE) Dialysis Membrane – 500 D MWCO | Fisher Scientific | 68-671-24 |
Millipore IC Millex-LG Filter Units | Fisher Scientific | SLLG C13 NL |
xylenol orange tetrasodium salt | Alfa Aesar | 41379 |
acetic acid | Fluka | 49199 |
D2O | Cambridge Isotope Laboratories, Inc. | DLM-4-25 |
water purifier | ELGA | Purelab Ultra |
high performance liquid chromatography and mass spectrometry | Shimadzu | LCMS-2010EV |
relaxation time analyzer | Bruker | mq60 minispec |
UV-vis spectrophotometer | Fisher Scientific | 20-624-00092 |
freeze dryer | Fisher Scientific | 10-030-133 |
pH meter | Hanna Instruments | HI 221 |
spectrofluorometer | HORIBA Jobin Yvon | Fluoromax-4 |
Molecular Weight Calculator version 6.46 by Matthew Monroe, downloaded October 17, 2009 | http://ncrr.pnl.gov/software/ | Molecular Weight Calculator |