Summary

وحيد ذبابة الفاكهة Ommatidium تشريح والتصوير

Published: August 19, 2011
doi:

Summary

عامل يحد من استخدام الكبار<em> ذبابة الفاكهة</em> العين لدراسة تنكس عصبي وبيولوجيا الخلية هو صعوبة التصوير من العمليات داخل الخلايا. وصفنا تشريح ommatidia واحدة لإنشاء النية الحسنة ، زراعة الخلايا العصبية الأولية ، والتي يمكن أن تخضع للعلاج بالعقاقير والتصوير المتقدمة.

Abstract

جعلت ذبابة الفاكهة ذبابة الفاكهة السوداء البطن مساهمات لا تقدر بثمن للبحث علم الأعصاب ، واستخدمت على نطاق واسع كنموذج للأمراض العصبية بسبب الوراثة القوية 1. وقد عين الذبابة لا سيما الجهاز المفضل للبحوث تنكس عصبي ، ويجري الجزء الأكثر الوصول إليها والاستغناء عنها ، من حياة النظام العصبي ذبابة الفاكهة. لكن التحذير من العيون كبرى سليمة هو صعوبة ، وذلك بسبب تألق ذاتي مكثفة من الصباغ ، والأحداث في التصوير داخل الخلايا ، مثل ديناميات 2 الالتهام الذاتي ، والتي لها أهمية قصوى لفهم تنكس عصبي.

لقد اعتدنا في الآونة الأخيرة تشريح وثقافة واحدة ommatidia 3 التي كانت ضرورية لفهمنا للاختلالات autophagic في نموذج يطير من Dentatorubro – Pallidoluysian الضمور (DRPLA) 3 ، 4.

نحن الآن التقرير وصفا شاملا لهذه التقنية (الشكل 1) ، وتكييفها من الدراسات الكهربية 5 ، التي من المرجح أن يتوسع بشكل كبير في إمكانية نماذج الطيران لتنكس عصبي. ويمكن تكييف هذه الطريقة لصورة حية الأحداث التحت خلوية ، ورصد فعالية الدواء على خلايا مستقبلة للضوء (الشكل 2). إذا استعملت في تآلف مع تقنيات الفسيفساء 6-8 ، يمكن أن يعاير ردود الخلايا المختلفة وراثيا بشكل متواز (الشكل 2).

Protocol

1. تشريح الشبكية ذبابة الفاكهة سد بئر واحدة من الشرائح الزجاجية 3 – حسنا مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS 1X) ، وتخدير ثم عن طريق الذباب CO 2. ويمكن استخدام كل من الذكور والإناث لهذه التجربة. <li style=";text-align:right;direction:rt…

Discussion

تشريح ommatidium احدة المعروضة هنا يمكن جمع معلومات أكثر عمقا حول الخلية البيولوجية مثل العمليات تنكس عصبي ، عندما غرار ذبابة الفاكهة في العين. الخلايا العصبية مستقبلة للضوء أكثر يمكن الوصول إليها بسهولة من الخلايا العصبية الأخرى ، وأنهم السيتوبلازم كبيرة على …

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

نشكر برنار Charroux للمناقشات. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المدرسة الطبية بوكل.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Portable CO2 Dispenser Flystuff 59-150 Refills also available
DUMONT Tweezer No 5 AGAR Scientific T5034  
3-Well Glass Slide EMS 71561-01  
Micro scissors VWR HAMMHSB516-09  
Schneider’s Medium VWR 733-1663  
LysoTracker Red DND-99 Invitrogen L7528  
Superfrost Slides VWR 631-0108  
Vectashield with Dapi Vector Labs H-1200  
Coverslips VWR 631-1336  

Referências

  1. Marsh, J. L., Thompson, L. M. Drosophila in the study of neurodegenerative disease. Neuron. 52, 169-178 (2006).
  2. Mizushima, N., Levine, B., Cuervo, A. M., Klionsky, D. J. Autophagy fights disease through cellular self-digestion. Nature. 451, 1069-1075 (2008).
  3. Nisoli, I. Neurodegeneration by polyglutamine Atrophin is not rescued by induction of autophagy. Cell Death Differ. 17, 1577-1587 (2010).
  4. Charroux, B., Fanto, M. The fine line between waste disposal and recycling: DRPLA fly models illustrate the importance of completing the autophagy cycle for rescuing neurodegeneration. Autophagy. 6, 667-669 (2010).
  5. Hardie, R. C. Voltage-sensitive potassium channels in Drosophila photoreceptors. J Neurosci. 11, 3079-3095 (1991).
  6. Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development. Trends in neurosciences. 24, 251-254 (2001).
  7. Xu, T., Rubin, G. M. Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues. Development. 117, 1223-1237 (1993).
  8. Gambis, A., Dourlen, P., Steller, H., Mollereau, B. Two-color in vivo imaging of photoreceptor apoptosis and development in Drosophila. Dev Biol. 351, 128-1234 (2011).
  9. Napoletano, F. Polyglutamine Atrophin provokes neurodegeneration in Drosophila by repressing fat. The EMBO journal. 30, 945-958 (2011).
  10. Ravikumar, B. Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease. Nature. 36, 585-595 (2004).
  11. Zou, S., Meadows, S., Sharp, L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. Genome-wide study of aging and oxidative stress response in Drosophila melanogaster. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 13726-13731 (2000).
check_url/pt/2882?article_type=t

Play Video

Citar este artigo
Volpi, V., Mackay, D., Fanto, M. Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging. J. Vis. Exp. (54), e2882, doi:10.3791/2882 (2011).

View Video