Brain Skiva Stimulering med hjälp av en Mikroflödessystem nätverk och Standard perfusion avdelningen
Summary
Vi visar tillverkning av en enkel mikroflödessystem enhet som kan integreras med standard elektrofysiologi uppställningar för att exponera mikroskala ytor av en hjärna skiva på ett väl kontrollerat sätt till olika signalsubstanser.
Abstract
Vi har visat tillverkning av en två-nivå mikroflödessystem enhet som enkelt kan integreras med befintliga elektrofysiologi inställningar. De två nivåer mikroflödessystem enheten är tillverkad med hjälp av en två-stegs-standarden negativa motstå litografi process 1. Den första nivån innehåller mikrokanaler med in-och utlopp i vardera änden. Den andra nivån innehåller mikroskala cirkulärt hål ligger mitt i kanalen längd och centrerad tillsammans med kanalbredd. Passiv pumpa metoden används för att pumpa vätskor från inloppet till utloppet 2. Den mikroflödessystem enheten är integrerad med off-the-shelf kamrarna perfusion och möjliggör sömlös integration med elektrofysiologi installationen. Vätskorna introducerades på inloppsportar flödet genom mikrokanaler mot utloppet hamnar och även fly genom den cirkulära öppningar placerade på toppen av mikrokanaler i badet av perfusion. Således bottenytan av hjärnan skiva placeras i perfusion kammaren badet och ovanför mikroflödessystem enheten kan utsättas med olika signalsubstanser. Den mikroskala tjocklek mikroflödessystem enheten och öppna karaktär av material [glas täckglas och PDMS (Polydimetylsiloxan)] används för att göra mikroflödessystem enhet möjliggör mikroskopering av hjärnan skiva. Den mikroflödessystem Enheten tillåter modulering (både rumsliga och tidsmässiga) av de kemiska stimuli presenterades för mikromiljöer hjärnan slice.
Protocol
Discussion
Befintliga makroskala eller mikroskala hjärnan skiva perfusion kamrar är begränsade när det gäller den rumsliga upplösningen de ger utsätta hjärnan skivor med signalsubstanser. Den mikroflödessystem enhet tekniken visat här övervinner denna begränsning med enkla bioMEMS tekniker. Det förväntas att enkelheten i tillverkningen av mikroflödessystem enheten och enkelt att integrera dem med befintliga elektrofysiologi uppställningar kommer att tillåta utbredd tillämpning av visat anordningen tekniken. Intressant experiment som …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Finansieringen kom från NIH MH-64.611 och NARSAD Young Investigator Award. Författarna vill också erkänna Adam Beagley, Mark Dikopf och Ben Smith för deras tekniskt bistånd.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| RC-26GPL | Tool | Warner Instruments | W2-64-0236 | Low Profile Large Bath RC-26GLP Recording Chamber |
| SHD-26GH/10 | Tool | Warner Instruments | W2-64-0253 | Stainless steel slice hold-down for RC-26G, 1.0 mm thread spacing |
| PDMS (polydimethylsiloxane) | Reagent | Dow Corning | Sylgard 184 | Silicone Elastomer Kit |
| Plasma Preen-II 862 | Tool | Plasmatic Systems, Inc. | Microwave plasma system | |
| Model P-1 | Tool | Warner Instruments | W2-64-0277 | Series 20 Plain Platform, Model P-1 |
| SA-NIK | Tool | Warner Instruments | W2-64-0291 | Adapter for Nikon Diaphot/TE200/TE2000, SA-NIK |
| Oxygenated, heated ACSF (Artificial cerebro-spinal fluid) | Reagent | Exact composition will vary with application |
Referências
- Blake, A. J., Pearce, T. M., Rao, N. S., Johnson, S. M., Williams, J. C. Multilayer PDMS microfluidic chamber for controlling brain slice microenvironment. Lab on a Chip. 7, 842-849 (2007).
- Walker, G. M., Beebe, D. J. A passive pumping method for microfluidic devices. Lab on a Chip. 2, 131-134 (2002).
