종양 세포의 Vasculogenic 활동을 평가 Matrigel 기반 튜브 형성 분석

Summary

튜브 형성 분석은 종양 세포의 혈관 활동을 평가하는 데 사용됩니다.

Abstract

지난 몇 년간, 튜브 형성 분석 성장을 사용하는 인자 – 감소 Matrigel 일반적으로 체외 ^1-5에서 혈관 내피 세포의 angiogenic 활동을 입증하기 위해 채용되었습니다. 그러나, 최근에 성장 증거는이 분석은 내피 세포에 대한 혈관 동작을 테스트하기 위해 제한 아니라는 것을 보여주었다. 대신, 그것은 또한 혈관 표현형 ^6-8을 개발하는 종양 세포의 숫자의 능력을 테스트하는 데 사용되었습니다. 이 기능은 xenotransplanted 동물, vasculogenic 흉내 (VM) ^9라는 과정에서 확인된 그들의 vasculogenic 행동과 일치했다. 그 종양 세포 매개의 VM이 내피 세포 angiogenesis ^{6, 10-13의} 독립 종양 개발에 중요한 역할을 보여주는 증거 다수가있다. 예를 들어, 종양 세포는 흑색증 및 glioblastoma 환자 ^{8, 10, 11} 조직 샘플에서 혈액 perfused, 혈관 채널 형성에 참여하는 발견되었습니다. 여기, 우리는 종양 세포의 vasculogenic 활동의 평가에 유용한 도구로 관형 네트워크 분석을 설명했다. 우리는 이러한 흑색증 B16F1 세포, glioblastoma U87 세포와 유방암 MDA – MB – 435 세포와 같은 일부 종양 세포 라인 혈관 tubules를 형성 할 수있다는 사실을 발견했다,하지만 일부는 결장암 HCT116 세포와 같은하지 않습니다. 또한,이 혈관 표현형는 Matrigel에 도금 휴대폰 번호에 따라 좌우됩니다. 따라서이 분석은 혈관 세포, 종양 세포뿐만 아니라 다른 세포를 포함한 세포 유형의 다양한 혈관 가능성을 화면에 강력한 유틸리티로 사용될 수 있습니다.

Protocol

1. 종양 세포의 Vasculogenic 활동을 평가 Matrigel 기반 튜브 형성 분석 종양 세포 및 microvascular 내피 세포의 준비 같은 U87 세포, 흑색증 세포 B16F1, 유방 암 MDA – MB – 435, 그리고 결장 세포 HCT116과 같은 뇌 종양 세포는 (10 % FBS 및 페니실린 / 스트렙토 마이신과 보충 DMEM에서 재배되었다 Invitrogen에서 ). 내피 세포주 인간 microvascular 내피 세포 (HMVECs은) 1 μg / ML 하이드로코티손 1 NG / ML 표피 성장 인자 10…

Discussion

성공이 분석하기 위해서, Matrigel의 품질 먼저 테스트해야합니다. 작은 샘플 HMVECs를 사용하여 분석을 미리 실행 Bioscience BD에서 구할 수 있습니다. 다른 배치 제품은 일부 많은 튜브 형성을위한 최적의 조건을 제공하지 않는에 …와 비슷하지 않은 자질을 표시할 수 있습니다. Matrigel의 나누어지는가 96 – 웰 플레이트에 로드할 때 거품이 가느다란 관 형성을 방해 할 수 있기 때문에 둘째, 모든 거품은 …

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number
DMEM	Invitrogen	11995
FBS	Invitrogen	16000-044
Growth factor-reduced Matrigel	BD Bioscience	47743-720
EBM2 kit	Lonza	CC-3156
Nikon ECLIPSE TS100 microscope	Nikon