En Matrigel-Based Tube Formation analys för att bedöma vaskulär aktivitet av tumörceller
Summary
Ett rör formation analys används för att utvärdera vaskulär aktivitet tumörceller.
Abstract
Under de senaste decennierna, ett rör bildandet analysen med tillväxtfaktor-reducerad Matrigel har vanligtvis används för att visa angiogena aktiviteten av vaskulära endotelceller in vitro 1-5. Emellertid har nyligen växande bevis visar att denna analys inte är begränsat för att testa vaskulära beteende för endotelceller. Istället även den har använts för att testa förmågan hos ett antal tumörceller för att utveckla en vaskulär fenotyp 6-8. Denna funktion överensstämde med deras vaskulär beteende identifieras i xenotransplanted djur, en process som kallas vaskulär mimicry (VM) 9. Det finns en mängd bevis som visar att tumören cellmedierad VM spelar en viktig roll i tumörutveckling, oberoende av endotelceller angiogenes 6, 10-13. Till exempel var tumörceller funnit att delta i blodet perfusion, kärl-kanalen bildas i vävnadsprover från melanom och glioblastom patienter 8, 10, 11. Här beskrivs vi detta tubulär nätverk analys som ett användbart verktyg i utvärderingen av vaskulär aktivitet av tumörceller. Vi fann att vissa tumörceller linjer såsom melanom B16F1 celler, glioblastom U87 celler och bröstcancer MDA-MB-435 celler kan bilda vaskulära tubuli, men inte alla såsom coloncancer HCT116 celler. Dessutom är detta vaskulär fenotyp beroende av cell nummer pläterade på Matrigel. Därför kan denna analys fungera som kraftfulla verktyg för att skärmen vaskulär potentialen i ett antal olika celltyper, inklusive vaskulära celler, tumörceller och andra celler.
Protocol
Discussion
För att denna analys ska lyckas bör kvaliteten på Matrigel testas först. Ett litet urval kan erhållas från BD Bioscience att i förväg köra analysen med HMVECs. Olika parti produkter kan visas olika kvaliteter där vissa partier inte ger en optimal förutsättning för att tub bildas. För det andra bör alla bubblor undvikas när en delmängd av Matrigel laddas i 96-håls plattor, eftersom bubblor kan störa tubuli bildas. Om små bubblor finns i en brunn, kan Matrigel omedelbart flyttas tillbaka till den urspr…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Detta arbete stöddes av NCI R01 CA120659 (RS).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 11995 |
| FBS | Invitrogen | 16000-044 |
| Growth factor-reduced Matrigel | BD Bioscience | 47743-720 |
| EBM2 kit | Lonza | CC-3156 |
| Nikon ECLIPSE TS100 microscope | Nikon |
Referências
- Shao, R., Guo, X. Human microvascular endothelial cells immortalized with human telomerase catalytic protein: a model for the study of in vitro angiogenesis. Biochemical & Biophysical Research Communications. 321, 788-794 (2004).
- Ribeiro, M. J. Hemostatic properties of the SV-40 transfected human microvascular endothelial cell line (HMEC-1). A representative in vitro model for microvascular endothelium. Thromb Res. 79, 153-1561 (1995).
- Ades, E. W. HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line. J Invest Dermatol. 99, 683-690 (1992).
- Shao, R. Acquired expression of periostin by human breast cancers promotes tumor angiogenesis through up-regulation of vascular endothelial growth factor receptor 2 expression. Molecular & Cellular Biology. 24, 3992-4003 (2004).
- Shao, R. YKL-40, a secreted glycoprotein, promotes tumor angiogenesis. Oncogene. 28, 4456-4468 (2009).
- Basu, G. D. A novel role for cyclooxygenase-2 in regulating vascular channel formation by human breast cancer cells. Breast Cancer Research. 8, R69-R69 (2006).
- Scavelli, C. Vasculogenic mimicry by bone marrow macrophages in patients with multiple myeloma. Oncogene. 27, 663-674 (2008).
- El Hallani, S. A new alternative mechanism in glioblastoma vascularization: tubular vasculogenic mimicry. Brain. 133, 973-982 (2010).
- Maniotis, A. J. Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro: vasculogenic mimicry. American Journal of Pathology. 155, 739-752 (1999).
- Hendrix, M. J., Seftor, E. A., Hess, A. R., Seftor, R. E. Vasculogenic mimicry and tumour-cell plasticity: lessons from melanoma. Nature Reviews Cancer. 3, 411-421 (2003).
- Folberg, R. Tumor cell plasticity in uveal melanoma: microenvironment directed dampening of the invasive and metastatic genotype and phenotype accompanies the generation of vasculogenic mimicry patterns. American Journal of Pathology. 169, 1376-1389 (2006).
- Liu, C. Prostate-specific membrane antigen directed selective thrombotic infarction of tumors. Pesquisa do Câncer. 62, 5470-5475 (2002).
- Sood, A. K. The clinical significance of tumor cell-lined vasculature in ovarian carcinoma: implications for anti-vasculogenic therapy. Cancer Biology & Therapy. 1, 661-664 (2002).
- Shirakawa, K. Hemodynamics in vasculogenic mimicry and angiogenesis of inflammatory breast cancer xenograft. Pesquisa do Câncer. 62, 560-566 (2002).
- Ruf, W. Differential role of tissue factor pathway inhibitors 1 and 2 in melanoma vasculogenic mimicry. Pesquisa do Câncer. 63, 5381-5389 (2003).
- Seftor, R. E. Cooperative interactions of laminin 5 gamma2 chain, matrix metalloproteinase-2, and membrane type-1-matrix/metalloproteinase are required for mimicry of embryonic vasculogenesis by aggressive melanoma. Pesquisa do Câncer. 61, 6322-6327 (2001).
- Shirakawa, K. Vasculogenic mimicry and pseudo-comedo formation in breast cancer. International Journal of Cancer. 99, 821-828 (2002).
