وضع عامل النمو المغلفه الخرز على أجنة الدجاج المرحلة المبكرة
Summary
مجموعة متنوعة من العوامل المساعدة على النمو وبروتينات الخلايا تتفاعل للحث على تحمل مصائر مختلفة من الخلايا خلال التنمية. نحن هنا لشرح استخدام من البيضة استعدادا لمواجهة التفاعلات المحتملة بين مختلف البروتينات في التنمية من خلال وضع حبات الحمص E2.5 على الأجنة.
Abstract
الأنبوب العصبي يعرب العديد من البروتينات في أنماط محددة خلال spatiotemporal التنمية. وقد تبين أن هذه البروتينات لتكون حاسمة لتحديد مصير الخلايا ، والهجرة الخلية ، وتشكيل الدوائر العصبية. تحريض الخلايا العصبية والعظام تشمل الزخرفة تخلقية البروتين (BMP) ، القنفذ الصوتي (SHH) ، عامل نمو الخلايا الليفية (جمعية جيل المستقبل) ، وبين الآخرين. على وجه الخصوص ، تعبيرا عن نمط Fgf8 هو على مقربة من المناطق معربا عن BMP4 وSHH. هذا النمط هو التعبير بما يتفق مع التفاعلات التنموية التي تسهل الزخرفة في telencephalon.
هنا نقدم مظاهرة البصرية من الطريقة التي يمكن استخدام البيضة في التحضير لاختبار آثار Fgfs في تشكيل الدماغ المقدم. والمغلفة مع حبات من البروتين ، ووضعها في أنبوب العصبي النامية لتوفير التعرض المستمر. لأن يستخدم الإجراء الصغيرة والخرز وضعت بعناية ، فمن مينيملي ويسمح لتوضع حبات عدة داخل أنبوب العصبي واحدة. وعلاوة على ذلك ، فإن الأسلوب يسمح لاستمرار التنمية بحيث يمكن تحليل الأجنة في مرحلة اكثر نضجا للكشف عن تغيرات في التشريح والعصبية في الزخرفة. هذا البروتوكول بسيطة ولكنها مفيدة تسمح للتصوير في الوقت الحقيقي. فإنه يوفر وسيلة لإحداث تغييرات محدودة مكانيا وزمانيا إلى مستويات البروتين الذاتية.
Protocol
Discussion
اعتمادا على البروتينات التي ترغب في استخدامها ، وهناك بروتوكولات مختلفة حول كيفية إعداد الخرز. في هذه التجارب ، ونحن نستخدم الهيبارين – الاكريليك الخرز ، ولكن يمكن استخدامها أيضا افى هلام حبات يكون. لقد وجدنا أن الهيبارين – الاكريليك الخرز هي أسهل للتلاعب في البيئة المائية من زل…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Fertilized, E2-2.5 (~ St. 17 HH) | ||
| Incubator | Profi-I | Lyon | ||
| India Ink | Tool | Higgins | Prepare a 4% solution in sterile PBS. | |
| Sterile PBS | Alternatively, an antibody cocktail can be used | |||
| 1ml syringe | ||||
| 27G 1/2 needles | Tool | BD | 305109 | Angled at 90 degrees |
| Forceps | Tool | World Precision Instruments | size 55 | |
| Hemostats | ||||
| Dissection scissors | Tool | World Precision Instruments | 500086 | vannas, 8.5cm |
| Parafilm tape | to seal eggs | |||
| Tungsten Probe | Tool | Electron Microscopy Sciences | 62091 | Tool #24. Handle optional. |
References
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. Jounal of Visualized Experiments. 8, (2007).
- Crossley, P. H., Martinez, S., Ohkubo, Y., Rubenstein, J. L. Coordinate expression of Fgf8, Otx2, Bmp4, and Shh in the rostral prosencephalon during development of the telencephalic and optic vesicles. Neuroscience. 108, 183-206 (2001).
- Alexandre, P., Bachy, I., Marcou, M., Wassef, M. Positive and negative regulations by FGF8 contribute to midbrain roof plate developmental plasticity. Development . 133, 2905-2913 (2006).
