配售早期鸡胚生长因子包被的磁珠

Summary

多种生长因子和蛋白质相互作用，从而诱导细胞在发展过程中不同的细胞命运。在这里，我们展示了一个在OVO准备使用，以解决发展中的不同的蛋白质之间可能的相互作用，由珠E2.5鸡胚。

Abstract

神经管表示在特定的时空模式，在开发过程中的多种蛋白质。这些蛋白质已被证明是对细胞命运的决心，细胞迁移，并形成神经回路至关重要。神经元的诱导和图案涉及骨形态发生蛋白（BMP），刺猬（SHH），成纤维细胞生长因子（FGF），等等。 FGF8的表达模式，尤其是在邻近地区表达BMP4和SHH。这种表达模式与发展的互动，以促进在端脑的图案一致。

在这里，我们提供的视觉示范在其中OVO准备一个可以用来测试在形成前脑Fgfs的影响的方法。珠涂有蛋白质和发展中的神经管提供持续的曝光。因为程序使用小，小心地放在珠，这是微创，并允许被放置在一个单一的神经管几个珠子。此外，该方法可以使胚胎可以在一个比较成熟的的阶段分析，以检测在解剖学和神经图案的变化，持续发展。这一简单实用的协议允许实时成像。它提供了一种手段，使内源性蛋白水平的空间和时间有限的修改。

Protocol

1。取出鸡蛋从孵化器在E2 – 2.5（〜圣17 HH），去掉鸡蛋和相应准备。他们可工作立即或几个小时的孵化器。鸡蛋可以安全地放置在室温下了一个多小时。鸡蛋可以留出操作的持续时间。有时，这些都需要一个小时或更长时间。 注 ：他们在室温下坐的时间越长，不太可能，他们要生存。 2。印度墨水的制备准备新鲜的解决?…

Discussion

根据您要使用的蛋白质，有不同的协议，关于如何准备珠。在这些实验中，我们使用肝素丙烯酸珠，但也可用于阿菲 – 凝胶珠。我们发现，肝素丙烯酸珠更容易操纵在水环境中的卵白蛋白。珠蛋白质在5升浸泡在4 ° C过夜控制珠被放置在无菌PBS，直到放置时间。在使用OVO准备的优点是，胚胎仍然活着，和自由发展^通常为1。虽然保存在其中的一个外植体的环境，可用于特定变量控制的，活的胚胎允许^的<…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Eggs	Animal			Fertilized, E2-2.5 (~ St. 17 HH)
Incubator	Profi-I	Lyon
India Ink	Tool	Higgins		Prepare a 4% solution in sterile PBS.
Sterile PBS				Alternatively, an antibody cocktail can be used
1ml syringe
27G 1/2 needles	Tool	BD	305109	Angled at 90 degrees
Forceps	Tool	World Precision Instruments		size 55
Hemostats
Dissection scissors	Tool	World Precision Instruments	500086	vannas, 8.5cm
Parafilm tape				to seal eggs
Tungsten Probe	Tool	Electron Microscopy Sciences	62091	Tool #24. Handle optional.