Различные факторы роста и белки взаимодействуют, чтобы побудить клетки взять на себя разные судьбы клетка в процессе разработки. Здесь мы показываем, использование в ово подготовки к устранению возможных взаимодействий между различными белками в развитии путем размещения бусины на E2.5 куриных эмбрионов.
Abstract
Нервной трубки выражает многие белки в конкретных пространственно-временных моделей в процессе разработки. Эти белки, как было показано иметь решающее значение для сотовых судьба решимость, миграции клеток и формирования нейронных цепей. Нейронные индукции и структурирование привлекать костные морфогенетические белки (BMP), звуковой еж (SHH), фактор роста фибробластов (FGF), среди других. В частности, выражение структуры Fgf8 находится в непосредственной близости к регионам выражения BMP4 и SHH. Это выражение же ситуация наблюдается и с отклонениями в развитии взаимодействия, которые облегчают структурирование в конечном мозге.
Здесь мы предлагаем наглядной демонстрации метода, в котором в ово препарат может быть использован для тестирования эффектов FGFs в формировании переднего мозга. Бусины покрыты белком и помещен в развивающихся нервной трубки оказывать постоянную экспозицию. Поскольку процедура использует маленькие, тщательно помещены шарики, это минимально инвазивный и позволяет несколько бусин, чтобы быть размещены в пределах одной нервной трубки. Более того, метод позволяет в постоянном развитии, так что эмбрионы могут быть проанализированы на более зрелой стадии, чтобы обнаружить изменения в анатомии и в нейронных кучность стрельбы. Этот простой, но полезный протокол позволяет в режиме реального времени изображения. Он обеспечивает средства, чтобы во времени и пространстве ограниченных изменений к эндогенным белка.
Protocol
1. Удалить яйца из инкубатора На E2-2.5 (~ 17 Санкт-НН), удалить яйца и готовить их соответствующим образом. Они могут быть разработаны сразу же или возвращен в инкубаторе в течение нескольких часов. Яйца могут быть размещены при комнатной температуре безопасно в течение часа. Я?…
Discussion
В зависимости от белка вы хотите использовать, Существуют различные протоколы о том, как подготовить бисером. В этих экспериментах мы используем гепарин-акриловые бусины, но Аффи-гель бусины могут быть также использованы. Мы обнаружили, что гепарин-акриловые бусины легче манипулировать в водной ?…