Размещение фактор роста покрытием бисер на ранних эмбрионов куриного этап
Summary
Различные факторы роста и белки взаимодействуют, чтобы побудить клетки взять на себя разные судьбы клетка в процессе разработки. Здесь мы показываем, использование в ово подготовки к устранению возможных взаимодействий между различными белками в развитии путем размещения бусины на E2.5 куриных эмбрионов.
Abstract
Нервной трубки выражает многие белки в конкретных пространственно-временных моделей в процессе разработки. Эти белки, как было показано иметь решающее значение для сотовых судьба решимость, миграции клеток и формирования нейронных цепей. Нейронные индукции и структурирование привлекать костные морфогенетические белки (BMP), звуковой еж (SHH), фактор роста фибробластов (FGF), среди других. В частности, выражение структуры Fgf8 находится в непосредственной близости к регионам выражения BMP4 и SHH. Это выражение же ситуация наблюдается и с отклонениями в развитии взаимодействия, которые облегчают структурирование в конечном мозге.
Здесь мы предлагаем наглядной демонстрации метода, в котором в ово препарат может быть использован для тестирования эффектов FGFs в формировании переднего мозга. Бусины покрыты белком и помещен в развивающихся нервной трубки оказывать постоянную экспозицию. Поскольку процедура использует маленькие, тщательно помещены шарики, это минимально инвазивный и позволяет несколько бусин, чтобы быть размещены в пределах одной нервной трубки. Более того, метод позволяет в постоянном развитии, так что эмбрионы могут быть проанализированы на более зрелой стадии, чтобы обнаружить изменения в анатомии и в нейронных кучность стрельбы. Этот простой, но полезный протокол позволяет в режиме реального времени изображения. Он обеспечивает средства, чтобы во времени и пространстве ограниченных изменений к эндогенным белка.
Protocol
Discussion
В зависимости от белка вы хотите использовать, Существуют различные протоколы о том, как подготовить бисером. В этих экспериментах мы используем гепарин-акриловые бусины, но Аффи-гель бусины могут быть также использованы. Мы обнаружили, что гепарин-акриловые бусины легче манипулировать в водной ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Eggs | Animal | Fertilized, E2-2.5 (~ St. 17 HH) | ||
| Incubator | Profi-I | Lyon | ||
| India Ink | Tool | Higgins | Prepare a 4% solution in sterile PBS. | |
| Sterile PBS | Alternatively, an antibody cocktail can be used | |||
| 1ml syringe | ||||
| 27G 1/2 needles | Tool | BD | 305109 | Angled at 90 degrees |
| Forceps | Tool | World Precision Instruments | size 55 | |
| Hemostats | ||||
| Dissection scissors | Tool | World Precision Instruments | 500086 | vannas, 8.5cm |
| Parafilm tape | to seal eggs | |||
| Tungsten Probe | Tool | Electron Microscopy Sciences | 62091 | Tool #24. Handle optional. |
References
- Korn, M. J., Cramer, K. S. Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies. Jounal of Visualized Experiments. 8, (2007).
- Crossley, P. H., Martinez, S., Ohkubo, Y., Rubenstein, J. L. Coordinate expression of Fgf8, Otx2, Bmp4, and Shh in the rostral prosencephalon during development of the telencephalic and optic vesicles. Neuroscience. 108, 183-206 (2001).
- Alexandre, P., Bachy, I., Marcou, M., Wassef, M. Positive and negative regulations by FGF8 contribute to midbrain roof plate developmental plasticity. Development . 133, 2905-2913 (2006).
