Kanülierung der Maus Submandibular Speicheldrüsen über die Wharton-Gang

Summary

Ein Protokoll für die Kanülierung der Maus Glandula Speicheldrüse über die Wharton-Gang beschrieben. Für dieses Experiment ist die Trypanblau-Lösung als Färber verwendet werden, um zu demonstrieren, wie diese Technik effektiv liefert Infusionen in die gezielte Drüse, und die Zuverlässigkeit dieses neuen Ansatzes als potenzielle klinische Arzneimittelentwicklung / Zelltherapie für die Regeneration der Speicheldrüsen vorschlagen.

Abstract

Schwere Speicheldrüse Unterfunktion ist häufig bei Patienten mit Sjögren-Syndrom und diejenigen, die therapeutischen Bestrahlung erhalten in ihrem Kopf und Hals Regionen zur Behandlung von Krebs gefunden. Beide Gruppen von Patienten Symptome wie Xerostomie (Mundtrockenheit), Dysphagie (Störungen der Kau-und Schluckstörungen), schwere Karies, verändertes Geschmacksempfinden, Mund-Rachen-Infektionen (Candida), Mukositis, Schmerzen und Beschwerden.

. Ein innovativer Ansatz der regenerativen Medizin für die Behandlung von Speicheldrüsen hypo-Funktion ist in RS Redman, E Mezey et al 2009 spekuliert: Stammzellen können direkt durch Kanülierung werden in der Drüse abgelagert als wirksame Methode bei der Wiederbelebung der Funktionen der gestörten Orgel. Vermutlich werden die migrierten ausländischen Stammzellen in Drüsenzellen, die als Teil der Host-Funktion der Speicheldrüsen unterscheiden. Auch dieses ist Kanülierung Technik eine sinnvolle und effektive Methode für die klinische Gentransfer-Anwendung.

Hier zeigen die Schritte bei der Durchführung der Kanülierung Verfahren auf der Maus Glandula Speicheldrüse über die Wharton-Gang (Abb. 1) beteiligt. C3H-Mäuse (Charles River, Montreal, QC, Canada) sind für dieses Experiment, das unter sauberen konventionellen Bedingungen wurden an der McGill University Tier Resource Center gehalten werden. Alle Experimente wurden von der Universität Animal Care Committee genehmigt worden und wurden in Übereinstimmung mit den Richtlinien des Canadian Council on Animal Care.

Für dieses Experiment ist eine Trypanblau-Lösung in die Drüse durch die Öffnung des Wharton-Gang mit einer Insulin-Spritze mit einer 29-Gauge-Nadel eingehüllt in einem Polyethylen-Schlauch infundiert. Anschließend wird die Maus seziert, um zu zeigen, dass die Infusionen in die Drüse erfolgreich migriert.

Protocol

1. Verfahrensbeschreibung Subkutan zu injizieren 1 ul / g Körpergewicht von 0,5 mg / ml Atropinsulfat-Monohydrat (Kat. Nr. 11330, Fluka, USA) in jede Maus an den Speicheldrüsen Sekret von der Störung der Bewegung der Infusionen zu verhindern. Anesthetize jeder Maus mit 1 ul / g Körpergewicht von 100 mg / ml Ketamin und 20 mg / ml Xylazin (Phoenix Scientific, AR, USA) injiziert intraperitoneale (IP) Legen Sie die Maus auf eine maßgeschneiderte Kunststoff-Platt…

Discussion

Eine Schwierigkeit mit diesem Kanülierung Methode besteht darin, den Rückfluss der injizierten Lösung zu verhindern. Selbst wenn der Trypanblau-Lösung wurde vorübergehend in die Speicheldrüse erfolgreich migriert, kann der Speichel-Sekretion mit der Infusionen und verursachen Rückfluss der Trypanblau-Lösung aus der Drüse. Als Vorsichtsmaßnahme zusätzlich zur Verwendung Atropin zur Sekretion von Speichel hemmen, sollten die Polyethylenkanüle in die Wharton-Gang und der Kolben der Spritze für 60 Sekunden geha…

Materials

Name of the reagent	Tipo	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Atropine	Drug	Fluka	11330	To inhibit saliva secretion
Ketamine	Drug	Phoenix Scientific		Sedation
Xylazine	Drug	Phoenix Scientific
Polyethylene tubing (0.58 mm diameter)	Tube	Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems	427410	To insert over tip of needle to avoid tissue injury during insertion into Wharton’s duct.
Ultra Comfort Insulin syringe (with a 29G needle)	Syringe	Tyco Healthcare	600145
4% trypan blue	Stain	Gibco	15250