نموذج الفأر من القرنية الفحص جيب للدراسة الأوعية الدموية
Summary
القرنية هي فريدة من نوعها من حيث أنها تفتقر إلى أنسجة الأوعية الدموية. ومع ذلك ، يمكن أن يكون ذلك حافزا قويا نمو الاوعية الدموية والبقاء في القرنية بسبب عوامل عائية قوية. لذلك ، يمكن للقرنية توفير معنا أداة قيمة للدراسات عائية. هذا البروتوكول يوضح كيفية تنفيذ نموذج الفأر من مقايسة جيب القرنية وكيفية تقييم الأوعية الدموية التي تسببها عوامل عائية باستخدام هذا النموذج.
Abstract
والقرنية الطبيعي هو واضح للأنسجة الأوعية الدموية. ومع ذلك ، يمكن أن يتسبب الأوعية الدموية على النمو والبقاء على قيد الحياة في القرنية عندما تدار عائية العوامل القوية 1. وقد جعل هذا التفرد في مقايسة القرنية جيب واحد من النماذج الأكثر استخداما للدراسات الأوعية الدموية. القرنية يؤلف عدة طبقات من الخلايا. ولذلك فمن الممكن تضمين بيليه الذي يحتوي على عامل عائية من الاهتمام في القرنية للتحقيق في تأثيره 2،3 عائية. هنا ، ونحن نقدم خطوة خطوة من خلال مظاهرة لكيفية (I) تنتج عامل المحتوية عائية بيليه (II) تضمين بيليه في القرنية (III) تحليل الأوعية الدموية الناجمة عن معامل عائية من الفائدة. ومن المعروف منذ نمو الخلايا الليفية الأساسية عامل (bFGF) باعتباره واحدا من العوامل عائية أقوى 4 ، يتم استخدامه هنا للحث على الأوعية الدموية في القرنية.
Protocol
Discussion
وكان أول وصف الجيب القرنية الفأر نموذج الفحص في عام 1979 من قبل VR Muthukkaruppan وأورباخ R 6. وقد نشرت البروتوكولات مفصلة من قبل مختبرات مختلفة 2،3،7،8. عدلت مختبرنا وتستخدم هذه الطريقة في دراساتنا لسنوات عديدة 4. جيب القرنية فحص الفأر هو نموذج بسيط نسبيا مع استن…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويدعم بحثنا عن برنامج بحوث جماعية لل، المعاهد الوطنية للصحة المعهد الوطني للعيون.
Materials
| Equipment | Company | Catalog number |
|---|---|---|
| Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIV-BS |
| Von Graefe cataract knife (1.5x25mm blade, flat) | Ambler Surgical | 3401E |
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-50 |
| Slit lamp | Zeiss | 30 SL-M |
Table 1. Equipments
| Reagent | Company | Catalog# | Comments |
|---|---|---|---|
| bFGF (basic fibroblast growth factor) | PEPROTECH INC. | 100-18B | |
| Sucralfate (Sucrose octasulfate–aluminum complex) | Sigma | S0652 | 10% in PBS |
| poly-HEMA (Poly(2-hydroxyethyl methacrylate)) | Sigma | P3932 | 12% in Ethanol |
Table 2. Reagents and materials
Referências
- Cao, Y., Linden, P., Shima, D., Browne, F., Folkman, J. In vivo angiogenic activity and hypoxia induction of heterodimers of placenta growth factor/vascular endothelial growth factor. The Journal of clinical investigation. 98, 2507-2511 (1996).
- Rogers, M. S., Birsner, A. E., D’Amato, R. J. The mouse cornea micropocket angiogenesis assay. Nature. 2, 2545-2550 (2007).
- Poche, R. A., Saik, J. E., West, J. L., Dickinson, M. E. The mouse cornea as a transplantation site for live imaging of engineered tissue constructs. Cold Spring Harbor protocols. , 5416-54 (2010).
- Zhang, F. VEGF-B is dispensable for blood vessel growth but critical for their survival, and VEGF-B targeting inhibits pathological angiogenesis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 106-6152 (2009).
- Tong, S., Yuan, F. Dose response of angiogenesis to basic fibroblast growth factor in rat corneal pocket assay: I. Experimental characterizations. Microvascular research. 75, 10-15 (2008).
- Muthukkaruppan, V., Auerbach, R. Angiogenesis in the mouse cornea. Science. 205, 1416-1418 (1979).
- Ziche, M. Corneal assay for angiogenesis. Methods in molecular medicine. 46, 131-142 (2001).
- Ziche, M., Morbidelli, L. The corneal pocket assay. Methods in molecular biology. 467, 319-329 (2009).
