Мышь Модель Пробирной Роговица Карман для ангиогенеза исследование
Summary
Роговица уникален тем, что ему не хватает сосудистых тканей. Тем не менее, высокие темпы роста кровеносных сосудов и выживания могут быть вызваны в роговицы мощным ангиогенных факторов. Таким образом, роговица может предоставить нам ценный инструмент для исследования кровеносных сосудов. Этот протокол свидетельствует о том, как выполнить мышиной модели роговицы анализа карман и, как оценить ангиогенез индуцированных ангиогенных факторов с использованием этой модели.
Abstract
Нормальные роговицы ясно сосудистых тканей. Тем не менее, кровеносных сосудов могут быть вызваны для роста и выживания в роговице, когда мощный ангиогенных факторов находятся в ведении 1. Эта уникальность сделал анализ роговицы кармана один из наиболее часто используемых моделей для ангиогенеза исследований. Роговицы составляет несколько слоев клеток. Таким образом, можно встроить гранул содержащих ангиогенного фактора интереса к роговице, чтобы исследовать ее ангиогенного эффекта 2,3. Здесь мы предоставляем шаг за шагом демонстрация того, как (I) производят ангиогенного фактора содержащих гранулы (II) вставлять гранул в роговицу (III) анализирует ангиогенеза индуцированного ангиогенеза фактор интереса. Так как основной фактор роста фибробластов (bFGF) известен как один из самых мощных факторов ангиогенеза 4, он используется здесь, чтобы побудить ангиогенеза в роговице.
Protocol
Discussion
Карманные роговицы мыши анализа модель была впервые описана в 1979 году Muthukkaruppan VR и Ауэрбах R 6. Подробные протоколы были опубликованы различными лабораториями 2,3,7,8. Наша лаборатория изменен и использовал этот метод в наших исследованиях в течение многих лет 4. Карманные…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Наше исследование опирается на Внутренние программы исследований NIH, Национального Института глаза.
Materials
| Equipment | Company | Catalog number |
|---|---|---|
| Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIV-BS |
| Von Graefe cataract knife (1.5x25mm blade, flat) | Ambler Surgical | 3401E |
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-50 |
| Slit lamp | Zeiss | 30 SL-M |
Table 1. Equipments
| Reagent | Company | Catalog# | Comments |
|---|---|---|---|
| bFGF (basic fibroblast growth factor) | PEPROTECH INC. | 100-18B | |
| Sucralfate (Sucrose octasulfate–aluminum complex) | Sigma | S0652 | 10% in PBS |
| poly-HEMA (Poly(2-hydroxyethyl methacrylate)) | Sigma | P3932 | 12% in Ethanol |
Table 2. Reagents and materials
Referências
- Cao, Y., Linden, P., Shima, D., Browne, F., Folkman, J. In vivo angiogenic activity and hypoxia induction of heterodimers of placenta growth factor/vascular endothelial growth factor. The Journal of clinical investigation. 98, 2507-2511 (1996).
- Rogers, M. S., Birsner, A. E., D’Amato, R. J. The mouse cornea micropocket angiogenesis assay. Nature. 2, 2545-2550 (2007).
- Poche, R. A., Saik, J. E., West, J. L., Dickinson, M. E. The mouse cornea as a transplantation site for live imaging of engineered tissue constructs. Cold Spring Harbor protocols. , 5416-54 (2010).
- Zhang, F. VEGF-B is dispensable for blood vessel growth but critical for their survival, and VEGF-B targeting inhibits pathological angiogenesis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 106-6152 (2009).
- Tong, S., Yuan, F. Dose response of angiogenesis to basic fibroblast growth factor in rat corneal pocket assay: I. Experimental characterizations. Microvascular research. 75, 10-15 (2008).
- Muthukkaruppan, V., Auerbach, R. Angiogenesis in the mouse cornea. Science. 205, 1416-1418 (1979).
- Ziche, M. Corneal assay for angiogenesis. Methods in molecular medicine. 46, 131-142 (2001).
- Ziche, M., Morbidelli, L. The corneal pocket assay. Methods in molecular biology. 467, 319-329 (2009).
