En musmodell av hornhinnan Pocket-analys för Angiogenes Study
Summary
Hornhinnan är unik genom att den saknar vaskulära vävnader. Däremot kan robusta blodkärl tillväxt och överlevnad induceras i hornhinnan med potenta angiogena faktorer. Därför kan hornhinnan ge oss ett värdefullt verktyg för angiogena studier. Detta protokoll visar hur du utför den musmodell av hornhinnan fickan analysen och hur man bedömer angiogenes framkallas av angiogena hjälp av denna modell.
Abstract
En normal hornhinna är klart av vaskulära vävnader. Däremot kan blodkärlen förmås att växa och överleva i hornhinnan när potenta angiogena administreras 1. Denna unika har gjort hornhinnan fickan analys en av de mest använda modellerna för angiogenes studier. Hornhinnan komponerar flera lager av celler. Det är därför möjligt att bädda in en pellets som innehåller angiogena faktorn av intresse i hornhinnan för att utreda angiogena effekt 2,3. Här ger vi en steg för steg demonstration av hur man (jag) producera den angiogena faktorn som innehåller pellet (II) bädda in pelleten i hornhinnan (III) analysera angiogenes framkallas av den angiogena faktorn av intresse. Eftersom den grundläggande fibroblast tillväxtfaktor (bFGF) är känd som en av de mest potenta angiogena 4, är det här används för att inducera angiogenes i hornhinnan.
Protocol
Discussion
Musen hornhinnan fickan test modell beskrevs första gången 1979 av Muthukkaruppan VR och Auerbach R 6. Detaljerade protokoll har publicerats av olika laboratorier 2,3,7,8. Vårt laboratorium har modifierat och använt denna metod i våra studier i många år 4. Musen hornhinnan fickan analysen är en relativt enkel modell med stor reproducerbarhet. En annan fördel med denna modell är att eftersom hornhinnan normalt saknar blodkärl, det finns minsta bakgrund i denna analys. Därför …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Vår forskning stöds av Interna forskningsprogram NIH, National Eye Institute.
Materials
| Equipment | Company | Catalog number |
|---|---|---|
| Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIV-BS |
| Von Graefe cataract knife (1.5x25mm blade, flat) | Ambler Surgical | 3401E |
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11252-50 |
| Slit lamp | Zeiss | 30 SL-M |
Table 1. Equipments
| Reagent | Company | Catalog# | Comments |
|---|---|---|---|
| bFGF (basic fibroblast growth factor) | PEPROTECH INC. | 100-18B | |
| Sucralfate (Sucrose octasulfate–aluminum complex) | Sigma | S0652 | 10% in PBS |
| poly-HEMA (Poly(2-hydroxyethyl methacrylate)) | Sigma | P3932 | 12% in Ethanol |
Table 2. Reagents and materials
Referências
- Cao, Y., Linden, P., Shima, D., Browne, F., Folkman, J. In vivo angiogenic activity and hypoxia induction of heterodimers of placenta growth factor/vascular endothelial growth factor. The Journal of clinical investigation. 98, 2507-2511 (1996).
- Rogers, M. S., Birsner, A. E., D’Amato, R. J. The mouse cornea micropocket angiogenesis assay. Nature. 2, 2545-2550 (2007).
- Poche, R. A., Saik, J. E., West, J. L., Dickinson, M. E. The mouse cornea as a transplantation site for live imaging of engineered tissue constructs. Cold Spring Harbor protocols. , 5416-54 (2010).
- Zhang, F. VEGF-B is dispensable for blood vessel growth but critical for their survival, and VEGF-B targeting inhibits pathological angiogenesis. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 106-6152 (2009).
- Tong, S., Yuan, F. Dose response of angiogenesis to basic fibroblast growth factor in rat corneal pocket assay: I. Experimental characterizations. Microvascular research. 75, 10-15 (2008).
- Muthukkaruppan, V., Auerbach, R. Angiogenesis in the mouse cornea. Science. 205, 1416-1418 (1979).
- Ziche, M. Corneal assay for angiogenesis. Methods in molecular medicine. 46, 131-142 (2001).
- Ziche, M., Morbidelli, L. The corneal pocket assay. Methods in molecular biology. 467, 319-329 (2009).
