Adulte normale vascularisé tissus de mammifères qui manque de l'angiogenèse physiologique et qui n'a pas été exposé à une intervention chirurgicale est utilisée pour étudier: (i) l'initiation et le développement de l'angiogenèse après administration intrapéritonéale d'agents de test, et (ii) la modification de l'angiogenèse après l'administration systémique de certains agents de test.
Le mésentère de rat adulte angiogenèse fenêtre de dosage est biologiquement appropriée et est exceptionnellement bien adapté à l'étude de l'angiogenèse in vivo [voir les articles de synthèse], qui est la forme dominante de l'angiogenèse dans les tumeurs humaines et non-tumorale des tissus, comme nous le verrons dans l'examen des invités les documents 1,2. L'angiogenèse induite dans les parties membraneuses mésentérique par voie intrapéritonéale (IP) d'injection d'un facteur pro-angiogénique peut être modulée par voie sous-cutanée (sc), par voie intraveineuse (IV) ou orale (po) le traitement avec des agents modificateurs de choix. Chaque partie membraneuse du mésentère est translucide et encadrées par du tissu adipeux, ce qui lui donne une apparence de la fenêtre ressemblant.
Le test a les caractéristiques avantageuses suivantes: (i) le tissu test est nativement vascularisé, quoique faiblement, et depuis il est extrêmement mince, le réseau de microvaisseaux est pratiquement en deux dimensions, ce qui permet à l'ensemble du réseau pour être évalué au microscope in situ; ( ii) chez des rats adultes le tissu test manque significative l'angiogenèse physiologique, qui caractérise la plupart des adultes normaux des tissus de mammifères, le degré de vascularisation native est, cependant, en corrélation avec l'âge, tel que discuté dans 1; (iii) le niveau négligeable de l'angiogenèse induite par un traumatisme assure une sensibilité élevée, (iv) le dosage reproduit la situation clinique, selon le test de médicaments modulant l'angiogenèse sont administrés par voie systémique et les réponses observées reflètent l'effet net de toutes les voies métaboliques, cellulaires et moléculaires des altérations induites par le traitement, (v) le dosage permet d'évaluations objectives, quantitatives, les variables sans biais de l'extension spatiale microvasculaire, la densité et la formation de structures de réseau, ainsi que des capillaires germination, permettant ainsi des analyses statistiques robustes de la dose-effet et moléculaires relations structure-activité, et (vi ) le dosage révèle avec une grande sensibilité aux effets toxiques ou nocifs des traitements en termes de diminution du taux de physiologiques gain de poids corporel, comme des rats adultes une croissance vigoureuse.
Mât-à médiation cellulaire angiogenèse a été démontrée en utilisant ce dosage 3,4. Le modèle démontre un haut niveau de discrimination quant à la posologie à effet et les effets mesurés de la systémique administré chimiquement ou fonctionnellement médicaments étroitement liés et les protéines, y compris: (i) à faible dose, administré metronomically chimiothérapeutiques standard de rendement diversifié, la drogue les effets spécifiques (ie, les activités de l'angiogenèse suppressif, neutre ou angiogenèse stimulation 5), (ii) les risques naturels en fer-insaturés de la lactoferrine humaine, ce qui stimule le VEGF-A-médiée angiogenèse 6, et naturel de fer-insaturés lactoferrine bovine, qui inhibe le VEGF-A- angiogenèse médiation 7, et (iii) les fractions d'héparine de faible poids moléculaire produite par des moyens divers 8,9. Par ailleurs, le dosage est très adapté à des études sur les effets combinés sur l'angiogenèse d'agents qui sont administrés par voie systémique de façon simultanée ou séquentielle.
L'idée de faire cette vidéo provient de la fin du Dr Judah Folkman quand il a visité notre laboratoire et témoin de la méthodologie d'être démontrée.
Examen des documents (invité) discuter et évaluer le dosage
Norrby, K. Dans des modèles in vivo de l'angiogenèse. J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).
Norrby, K. Le dépistage des drogues avec des modèles de l'angiogenèse. Expert Opin. Drogues. Découvert. 3, 533-549 (2008).
Le test a été introduit en 1986 3 et a successivement été développé et affiné dans notre laboratoire 7,10-12. Comme indiqué dans les articles de synthèse (invité) 1, 2, le test se compare bien à d'autres mammifères dans le dosage angiogenèse in vivo à l'égard en particulier aux fonctions importantes telles que le tissu de test adulte est nativement vascularisé et manque de l'angiogenèse physiologique; un traumatisme minime, le cas échéant, est infligés au tissu; variables réellement quantitatifs sont mesurés, ce qui permet une analyse statistique sur la dose-réponse et moléculaire-activité des études; angiogenèse germination se produit, ce qui est prédominant dans les tissus normaux et de tumeurs, et les données de toxicité sont facilement accumulés chez les rats qui se développent vigoureusement physiologiquement à l'âge adulte. Caractéristiques défavorables peuvent comprendre le fait que le test est relativement fastidieux, surtout lorsque l'évaluation du nombre et la longueur des segments individuels et les choux de microvaisseaux microvaisseaux, qu'il ne permet pas d'observations real-time/serial, et qu'il n'est guère adaptée pour les souris Depuis de nombreuses fenêtres mésentérique chez la souris manque microvaisseaux parent potentiel à partir duquel de nouveaux capillaires peuvent provenir.
Observations en temps réel sont, cependant, permis par microscopie intravitale où les fenêtres extériorisé mais intact mésentériques sont écrasés sur une platine de microscope tandis que l'animal est anesthésié, tel que discuté dans 1.
Des avancées significatives dans la recherche sur l'angiogenèse ont été réalisés dans les dernières décennies en utilisant des modèles tels que la cornée micropocket, poussin chorioallantoïque membrane, et des dosages sc prise Matrigel, qui sont des outils utiles mais finalement limité. Les futures applications cliniques des thérapies anti-angiogéniques et pro-angiogéniques nécessiter l'établissement et la validation des plus sensibles et biologiquement pertinent, réellement quantitatifs modèles pré-cliniques, telles que celle décrite dans le rapport actuel.
The authors have nothing to disclose.
Soutien financier pour la plupart des études ont été fournies par le Conseil suédois de la recherche médicale (subvention 5942).
Buffers and reagents
0.5 M Tris-HCl (pH 7.8) stock solution
Tris (hydroxymethyl) aminomethan (60.57 g) is dissolved in ~900 ml aqua dest and ~45 ml of 25% HCl (concentrated) is added to achieve pH 7.8 followed by dilution to 1 liter with aqua dest.
Tris-buffer saline (TBS; pH 7.8)
To 200 ml of the stock solution is added 18 g NaCl dissolved in ~1800 ml aqua dest with adjustment of pH to 7.8 using the stock solution, followed by dilution to 2 liter with aqua dest.
TBS (pH 7.4)
To 200 ml of the stock solution is added 18 g NaCl dissolved in dissolved in ~1800 ml aqua dest with adjustment of pH to 7.4 using the stock solution, followed by dilution to 2 liter with aqua dest.
Trypsin solution (0.05% trypsin, 0.1% CaCl2)
Contains 0.1 g trypsin and 0.2 g CaCl2 in 200 ml TBS (pH 7.8).
Sucrose solution 2.5%
Contains 5 g sucrose in 200 ml TBS (pH 7.8).
Stock solution of 1% Sodium azide in TBS (pH 7.4)
Contains 1 g Na-azide in 100 ml with TBS (pH 7.4).
Diluting buffer: 0.1% BSA, 0.01% Na-azide
(Used to dilute antibodies in the Vectastain ABC kit). Contains 0.1 g bovine serum albumin (BSA) and 1 ml of 1% Na-azide, diluted to 100 ml with TBS (pH 7.4).
ABC kit Vectastain PK 4002, ABC peroxidase mouse IgG
Normal horse serum; blocking serum; yellow solution: 3 drops/10 ml dilution buffer.
Biotinylated antibody; anti-mouse IgG; blue solution: 1 drop/10 ml dilution buffer.
ABC-reagent: orange solution, 2 drops plus brown solution 2 drops/10 ml TBS (pH 7.4).
Mix these solutions 20 minutes before use!
Mouse (monoclonal) anti-rat endothelium(Biosource International, Camarillo, CA, U.S.A.)
Catalog # | ARU0181 |
Clone # | MRC OX-43 |
This antibody is directed against all vascular endothelial cells in the rat, with the exception of those in the brain.
Vectastain peroxidase Avidin Biotin Complex (ABC) kit
The kit contains primary antibody, biotinylated secondary antibody, avidin-biotinylated enzyme complex (ABC), and enzyme substrate. See www.vectorlabs.com or www.immunkemi.se for protocols.
Bovine serum albumin(BSA) (Sigma-Aldrich, catalog # A-4503).
DAB= 3,3′-Diaminobenzidine Isopac (Sigma-Aldrich, catalog # D 9015).
Trypsinfrom Bovine Pancreas (Sigma-Aldrich, catalog # T 4665).
Vectastain peroxidase ABC-kit, Mouse IgG (Immunkemi F & D AB, Jarfalla, Sweden)