Abbiamo sviluppato una base di collagene<em> In vitro</emTest> che promuove la proliferazione e l'invasione da campioni di tutti i sottotipi di tumore al seno. Tomografia ottica di proiezione, una tecnica di microscopia a tre dimensioni è stato utilizzato per visualizzare e quantificare l'espansione del tumore. Il test può essere utilizzato per quantificare risposta ai farmaci dei singoli campioni tumorali.
Il cancro al seno è una delle principali cause di mortalità nel mondo occidentale. E 'ben noto che la diffusione del tumore al seno, prima localmente e poi distalmente, è un fattore importante nella prognosi dei pazienti. Sistemi sperimentali di tumore al seno si basano su linee cellulari derivate da tumori di solito primaria o versamento pleurico. Due gli ostacoli principali ostacolare questa ricerca: (i) alcune note sotto-tipi di tumori al seno (in particolare scarsa prognosi dei tumori luminale B) non sono rappresentati all'interno di raccolte di linea corrente, (ii) l'influenza del microambiente tumorale di solito non è presa in considerazione.
Dimostriamo una tecnica per i campioni del cancro al seno primario cultura di tutti i sub-tipi. Questo è ottenuto utilizzando tridimensionale (3D) sistema di coltura in cui sono inserite piccole parti di tumore nel ratto collagene I cuscini morbidi. Entro 2-3 settimane, le cellule tumorali diffuse nel collagene e forma diverse strutture simili a quelli osservati in tumours1 umano. Adipociti vitali, le cellule epiteliali e fibroblasti all'interno del nucleo originario erano evidenti sulla istologia. Maligna delle cellule epiteliali con morfologia squamoidi sono state dimostrate in invadendo il collagene circostante. Pleomorfismo nucleare era evidente all'interno di queste cellule, insieme a figure mitotiche e corpi apoptotici.
Abbiamo impiegato Tomografia Ottica di proiezione (OPT), una tecnologia di imaging 3D, al fine di quantificare l'entità della diffusione del tumore nella cultura. Abbiamo usato OPT per misurare il volume della cultura di massa del tumore, un parametro di routine misurati durante la terapia neo-adiuvante dei pazienti con cancro al seno per valutare la risposta alla terapia farmacologica.
Qui, vi presentiamo l'opportunità di tumori al seno cultura umana, senza sotto-tipo di polarizzazione e quantificare la diffusione di questi ex-vivo. Questo metodo potrebbe essere utilizzato in futuro per quantificare la sensibilità ai farmaci nel tumore originale. Questo può fornire un modello più predittivo di linee cellulari attualmente in uso.
A base di collagene saggi per studiare il comportamento delle linee di cellule tumorali sono ora ampiamente utilizzate 6,7,8. Tuttavia, queste analisi non hanno riflesso in pieno la complessità del tumore e del suo ambiente. In questo studio, abbiamo dimostrato che il cancro al seno umano i materiali possono essere usati in modo simile, ex vivo. Inoltre, OPT è un utile strumento per caratterizzare l'espansione 3D di cancro al seno. Abbiamo scoperto che il limite principale di questa tecnica è la disponibilità di materiali tumore (un unico nucleo biopsia è sufficiente per 4-6 test). Un altro fattore limitante è che l'invasione strutturale si verifica solo nel 40% dei test. Per ovviare a questo, abbiamo regolarmente aggiungere qualsiasi trattamento desiderato intorno al giorno 7 per tutti i test con una crescita visibile.
L'uso di OPT potrebbe essere estesa in futuro anche per rilevare i cambiamenti di massa, ex vivo, derivante dalla terapia farmacologica. Ciò a sua volta potrebbe facilitare la terapia del cancro più individualizzata, indipendente di modelli animali. Stiamo attualmente valutando la risposta dei tumori ER + a tamoxifene ex vivo.
The authors have nothing to disclose.
Ringraziamo Lorna Renshaw (Breast Unit di Edimburgo) per la sua preziosa assistenza per ottenere campioni clinici.
Utilizzo di materiale tumorale è stato approvato dal Comitato Etico di ricerca Lothian (08/S1101/41) e ottenuto sotto l'egida del Centro di Medicina Sperimentale Cancer programma (Edimburgo).
Questo lavoro è supportato dal Consiglio scozzese finanziamento. ADL è una signorina Margaret Butters Reekie compagni Fiducia clinica.
Name of Reagent | Company | Catalogue No. |
MEGM Complete | Lonza | CC-3150 |
DMEM/F12 | Sigma-Aldrich | D8900 10X1L |
β-oestradiol | Sigma-Aldrich | E8875-250MG |
Rabbit anti-cytokeratin | Dako | Z0622 |
Goat anti-rabbit Alexa555 | Invitrogen | A21422 |
All other standard reagents were obtained from Sigma-Aldrich.