Microdissection laser des tissus de mammifères

Abstract

Microscopie à capture laser, également connu sous le nom de microdissection laser (LMD), permet à l'utilisateur d'isoler un petit nombre de cellules ou de tissus congelés ou fixés au formol, des coupes de tissus inclus en paraffine. Techniques LMD compter sur une membrane thermo labiles soit placé sur le dessus de, ou en dessous, la section de tissu. Dans une méthode, l'énergie laser focalisé est utilisé pour faire fondre la membrane sur les cellules sous-jacentes, qui peuvent ensuite être sortis de la section des tissus. Dans l'autre, l'énergie du laser vaporise la feuille long d'un chemin "tiré" sur le tissu, ce qui permet aux cellules sélectionnées pour tomber dans un dispositif de collecte. Chaque technique permet la sélection de cellules avec une résolution minimale de quelques microns. ADN, ARN, protéines, lipides et les échantillons peuvent être isolées et analysées à partir des micro-disséqués échantillons. Dans cette vidéo, nous démontrons l'utilisation du Leica AS-LMD instrument de microdissection laser en sept segments, y compris une introduction aux principes du LMD, l'initialisation de l'instrument pour l'utilisation, les considérations générales pour la préparation des échantillons, l'échantillon de montage et mise en place des tubes de capture , en alignant le microscope, en ajustant les commandes de capture, et la capture des spécimens de tissus. Laser-capture microdissection permet à l'enquêteur d'isoler des échantillons de populations de cellules pures aussi petit qu'une cellule peu d'équivalents. Cela permet l'analyse de cellules d'intérêt qui sont exemptes de contaminants voisins, qui pourrait fausser les résultats expérimentaux.