Laser Microdissecção Captura de tecidos de mamíferos

Abstract

Laser microscopia de captura, também conhecido como microdissecção a laser (LMD), permite ao usuário isolar um pequeno número de células ou tecidos de congelados ou fixadas em formalina, seções parafina do tecido. Técnicas LMD contar com uma membrana lábil termo colocado tanto em cima, ou embaixo, na seção de tecido. Em um método, a energia de laser focalizado é usado para derreter a membrana sobre as células subjacentes, que podem então ser retirado da secção de tecido. No outro, a energia do laser vaporiza a folha ao longo de um caminho "desenhada" no tecido, permitindo que as células selecionadas para cair em um dispositivo de coleta. Cada técnica permite a seleção de células com uma resolução mínima de microns diversas. DNA, RNA, proteínas, lipídios e as amostras podem ser isolados e analisados ​​a partir de micro-amostras dissecados. Neste vídeo, demonstramos o uso da Leica AS-LMD instrumento microdissecção a laser em sete segmentos, incluindo uma introdução aos princípios da LMD, inicializando o instrumento para uso, considerações gerais para preparação de amostras, a amostra de montagem e configuração de captura de tubos , alinhando ao microscópio, ajustando os controles de captura e capturar amostras de tecido. Laser de captura de micro-dissecção permite ao investigador para isolar amostras de populações de células pura tão pequeno como uma célula-equivalentes poucos. Isto permite a análise de células de interesse que estão livres de contaminantes vizinhos, que possam confundir os resultados experimentais.