초기 여자는 배아에서 Morphogenetic 조직 Deformations 추적
Summary
이 문서는 표면 레이블 및 설명<em> 전 비켜</em초기 여자의 배아에서> 조직 문화. 시간이 경과 명시야, 형광, 광학 일관성 tomography 이미징 의무 기법 제공됩니다. 높은 spatiotemporal 해상도 추적 표면 레이블은 둘 그리고 셋 차원 모두에서 계산하는 morphogenetic의 변종 (deformations)로 동점 수량을 수 있습니다.
Abstract
배아 상피 조직은 초기 배아의 원시 장기를 형성하기 위해 복잡한 deformations (예, 굽힘 비틀림, 접이식, 그리고 스트레칭) 받다. 이러한 세포 시트의 표면에 fiducial 마커를 추적하는 것은 같은 성장, 수축 및 전단 등 morphogenetic 수량을 계산하는 잘 구축 방법입니다. 그러나, 모든 표면 분류 기술은 기존 영상 modalities에 쉽게 적응하고 서로 다른 장점과 한계를 가지고있다. 여기, 우리는 두 가지 분류 방법을 설명하고 각 기술의 유틸리티를 보여줍니다. 첫 번째 방법에서는 형광 라벨의 수백 자기 철분 입자를 사용하여 배 (胚)에 동시에 적용됩니다. 이러한 라벨은 다음 morphogenesis 중에 2 – D 조직 deformations 수량하는 데 사용됩니다. 두 번째 방법에서는 폴리스티렌 microspheres는 3 – D 조직 deformations를 추적하는 비침습 광학 일관성 tomography (-10 월) 이미지의 대비 요원으로 사용됩니다. 이 기술은 성공적인 것으로정 일찍 머리를 접어, 심장, 뇌 개발의 물리적 메커니즘을 studythe하기 위해 실험실에서 구현하고, 다양한 범위 morphogenetic 프로세스에 적용할 수 있어야합니다.
Protocol
Discussion
두 조직 분류 기술은 초기에 여자는 태아의 전 비켜 문화 제공됩니다. 첫 번째는 동시에 세포의 수백 라벨 자기 철 입자를 통해 제공되는 형광 염료 lipophilic를 사용합니다. 형광 염료는 일반적으로 10월 10일를 사용하여 주변 조직에서 약간의 대비를 보여주 그러나이 방법은 현재 광학 일관성의 tomography와 호환되지 않습니다. 따라서, 우리는 시간 경과 OCT 분석을위한 조직을 레이블?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 NIH 보조금 R01 GM075200 및 R01 HL083393 (LAT)에 의해 지원되었다. 우리는 NIH T90 DA022871와 방사선과의 Mallinckrodt 연구소에서 BAF를위한 친목 지원을 인정하고, 미국 심장 협회에서 부여 09PRE2060795에서 VDV하십시오.
Materials
| Material / Reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| DMEM – high glucose | Sigma-Aldrich | D5796 | |
| Penicillin/Streptomycin/Neomycin | Sigma-Aldrich | P4083 | |
| Chicken Serum | Invitrogen | 16110-082 | |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D1408 | 10X |
| Whatman #2 Filter Paper | Whatman | 1002 090 | 90mm diameter |
| Glass Micropipettes | World Precision Instruments (WPI) | TW150-6 | 1.5mm inner diameter |
| DiI | Invitrogen | D-282 | |
| Iron Reduced | Mallinckrodt Baker Inc. | 5320 | |
| 10 μm Diameter Microspheres (black) | Polysciences Inc. | 24294 | |
| Delta T Dish (for time lapse culture) | Bioptechs | 04200415B | 0.17mm thick, black |
| Delta T4 Culture Dish Controller | Bioptechs | 0420-4-03 | |
| Mini-Pump Variable Flow Device | Fisher Scientific |
Referências
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