Нейроны первого характеризуется электрофизиологически. Затем из цитоплазмы записаны нейрона всасывается и подвергается обратной транскрипции-ПЦР-анализ для выявления экспрессии мРНК для синтеза нейромедиаторов ферменты, ионные каналы, и рецепторы.
Abstract
В млекопитающих центральной нервной системы, различных типов нейронов с различными молекулярными и функциональными характеристиками перемешаны друг с другом, трудно разделить, а также не так легко определить по их морфологии. Таким образом, часто бывает трудно проанализировать экспрессию генов в определенный тип нейронов. Здесь мы документе процедура, которая сочетает в себе целых клеток патч методы зажима записи с одноклеточных обратной транскрипции полимеразной цепной реакции (ПЦР-scRT) на профиль экспрессии мРНК в различных типах нейронов в существенной черная. Электрофизиологические методы впервые использована для записи нейрофизиологические и функциональные свойства отдельных нейронов. Затем, цитоплазме одной электрофизиологически характеризуется nigral нейронов всасывается и подвергается scRT-ПЦР-анализ для получения профилей экспрессии мРНК для синтеза нейромедиаторов ферментов, рецепторов и ионных каналов. Высокая селективность и чувствительность делают этот метод особенно полезен при иммуногистохимии не может быть использована из-за отсутствия подходящих антител или низкий уровень экспрессии белка. Этот метод также применим для нейронов в других областях мозга.
Protocol
1. Подготовка мозга срез Молодые (15-40 дней) мужского и женского Sprague-Dawley крыс используются. (Мы также используем эту же протокол на мышах.) При глубокой анестезии уретана, животных обезглавливали и мозг быстро расчлененное из. Затем 300 мкм толщиной корональных ломтики мозга, содержащ…
Discussion
Сочетание патч зажим записи в мозг с ломтиком scRT-PCR мы продемонстрировали здесь обеспечивают превосходный метод для исследования профилей экспрессии мРНК для ионные каналы, рецепторы, и ключевые ферменты для синтеза нейротрансмиттеров в индивидуальном характеризуется нейронов. Это ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана грантами NIH R01DA021194 и R01NS058850.
Materials
Table 1. Key reagents and equipment
Table 2. Primer pairs for rat neuronal Kv3 channel, tyrosine hydroxylase (TH) and glutamic acid decarboxylase 1 (GAD1) mRNAs for scRT-PCR
Ding, S., Zhou, F. M. Profiling Voltage-gated Potassium Channel mRNA Expression in Nigral Neurons using Single-cell RT-PCR Techniques. J. Vis. Exp. (55), e3136, doi:10.3791/3136 (2011).