애벌레의 심장 해부, 소년과 성인 Zebrafish, Danio rerio</em
Summary
여러 발달 단계에있는 zebrafish 심장의 해부 및 격리에 대한 명확하고 표준화된 방법 설명되어 있습니다. 주석과 부량 기법도 설명합니다.
Abstract
Zebrafish는 배아 심장 개발 연구 (최근 리뷰 1-6 참조) 유익하고 실용적인 모델 생물되고있는 그러나, 7-10을 제한되었습니다 성인 심장 개발을 통해 이후의 배아 검사 작동합니다. 성숙과 노화 마음의 변화 형태를 검사하는 것은 청소년과 어른 마음을 준비하고 분리에 사용할 기술의 부족에 의해 제한됩니다. 물고기의 수명 동안 심장 개발을 분석하기 위하여, 우리는 수많은 단계에서 zebrafish 마음을 해부하다하고 자세한 분석 11 그들을 사진. 심장의 형태학의 기능을 쉽게 계량 할 수 있으며, 개인의 마음은 더욱 표준 방식의 호스트에 의해 분석하실 수 있습니다. Zebrafish는 변수 속도로 성장하고 성숙 물고기 성숙의 계기로 포스트 고정, 우리 사진 및 측정 물고기의 길이, 따라서, 나이보다 생선 크기가 더 연결합니다. 이 프로토콜은 30mm와 VL 1mm의 SL 또는 더 큰와 어른 100μm 뇌실 길이 (VL)의 마음으로 애벌레 3.5mm 표준 길이 (SL)에 이르기까지 zebrafish에 대한 두 개의 크기에 의존 해부 기술을, 설명합니다. 애벌레와 어른 물고기는 아주 독특한 신체와 장기의 형태 있습니다. 애벌레는 훨씬 작습되지 않습니다, 그들은 덜 안료를 각 기관은 시각적으로 파악하는 것은 매우 어렵습니다. 이러한 이유로, 우리는 뚜렷한 해부 기술을 사용합니다.
우리가 euthanization 후 직접 해부하는 마음은 다음 고정을 제거 마음에 비해 심방과 같은 매우 느슨한과 풍선과 함께,보다 변수 형태를 갖고 발견으로 우리는 사전 해부 고정 절차를 사용합니다. 물고기는 생체내의 형태와 챔버 위치 (데이터가 표시되지 않음)에 보유, 이전 절개로 고정. 또한, 데모의 목적을 위해, 우리는 심장 (심근) 특정 GFP 유전자 변형 TG (myl7 : GFP)을 활용하여 우리가 전체 마음을 시각화 수 있으며 개발 초기 단계에서 특히 유용합니다 twu34 (12), 때 심장 형태 주변 조직에서 적은 구분됩니다. 심장의 해부는 현장 하이브리드화, immunohistochemistry, RNA 추출하거나 사후 배아 zebrafish에서 쉽게 다른 분석 방법을 사용하여 심장 개발과 성숙을 기본 세포와 분자 생물학의 추가 분석을합니다. 이 프로토콜은 심장 개발 성숙과 노화 연구에 대한 귀중한 기술을 제공합니다.
Protocol
Discussion
포스트 배아 물고기의 zebrafish 심장의 해부에 대한 이러한 방법은 손상되지 않은 마음의 완전한 제거를 허용합니다. 이 기술은 간단하고 마음을 손상하지 않도록 할 외부 상처에 대한 가이드를 제공하고 있지만, 꾸준한 손 작은 물고기를 위해 필수적입니다.
해부 중 주요 단계는 마음이 골목에서 직접입니다로 은빛 심낭을 식별하는 것입니다. 심낭을 떠올리면 뱃속을 찾는하…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
마리 Birne, Areti Tsiola, Jaymie 에스테베즈 및 Arelys 우리베 감사합니다. 이 작품은 CUNY 연구 재단과 학부생을위한 하워드 휴즈 의학 연구소 부여 여름 프로그램 (평)와 NIH RO3 41702-00-01에 의해 부분적으로 지원되었다. 연구는 또한 퀸즈 대학과 실험의 일부 이미징, 퀸즈 대학에서 세포와 분자 생물학의 핵심 시설의 설비에서 수행되었다에 의해 지원되었다.
Materials
| Material | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Paraformaldehyde | EMD | PX0055 | .04g/mL in PBS |
| Forceps #55 | FST | 11295-51 | |
| Micro-scissors | FST | 15005-08 | |
| Pin holder | FST | 26016-12 | |
| Micro-needles | FST | 10130-10 | |
| Nutrient Agar | BBL | 11472 | 23g/L in distilled H2O |
| Petri dishes | BD Falcon | 351029 | |
| PCR 8-tube strips | USA Scientific | 1402-2500 | |
| Digital Caliper | Fisher Scientific | 14-648-17 |
Referências
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