Desarrollo de una manera unilateral-lesionado 6-OHDA modelo de ratón de la enfermedad de Parkinson
Summary
Un protocolo para realizar unilaterales 6-OHDA lesiones del haz medial del cerebro anterior en ratones se ha descrito. Este método tiene una baja tasa de mortalidad (13,3%) con el 89% de los animales sobrevivientes que muestran la pérdida de> 95% de la dopamina estriatal y 90,63 ± -4,02% sesgo ipsiversive de rotación hacia el lado de la lesión.
Abstract
El unilateralmente lesionado 6-hyroxydopamine (6-OHDA)-lesionado modelo de rata de la enfermedad de Parkinson (EP) ha demostrado ser muy valiosa para avanzar en nuestra comprensión de los mecanismos que subyacen a los síntomas parkinsonianos, ya que recapitula los cambios en los circuitos de los ganglios basales y la farmacología observada en parkinsonianos los pacientes 1-4. Sin embargo, los cambios precisos celulares y moleculares que ocurren en estriatales córtico-sinapsis de las vías de salida dentro del cuerpo estriado, que es la región de entrada principal de los ganglios basales siendo difícil de alcanzar, y esto se cree que es el sitio donde anormalidades patológicas subyacentes síntomas parkinsonianos surgen 3 , 5.
En la EP, la comprensión de los mecanismos que subyacen a los cambios en la degeneración basal circuitos de los ganglios siguiente de la vía nigro-estriado se ha hecho avanzar por el desarrollo de cromosoma artificial bacteriano (BAC) ratones sobre-expresión de proteínas fluorescentes verdes impulsados por promover8, lo que les permite ser estudiados en forma aislada:;: específica para las dos vías de salida del estriado (EGFP-D2 y A2A-eGFP vía indirecta eGFP-D1 vía directa) rs. Por ejemplo, estudios recientes han sugerido que existen cambios patológicos en la plasticidad sináptica en ratones con Parkinson 9,10. Sin embargo, estos estudios utilizaron ratones jóvenes y los modelos agudos de parkinsonismo. No está claro si los cambios descritos en las ratas adultas con un nivel estable 6-OHDA lesiones también ocurren en estos modelos. Otros grupos han intentado generar un establo de manera unilateral-lesionado 6-OHDA modelo de ratón adulto de la DP a través de lesionar el paquete de medial del cerebro anterior (MFB), por desgracia, la tasa de mortalidad en este estudio fue muy alta, con sólo el 14% de sobrevivir a la cirugía para el 21 días o más, 11. Estudios más recientes han generado dentro de la sustancia nigra lesiones tanto con una baja tasa de mortalidad pérdida de> 80% de las neuronas dopaminérgicas, sin embargo la expresión de L-DOPA discinesia inducida por 11,12,13,14 fue variableen estos estudios. Otro modelo de ratón bien establecido de la enfermedad de Parkinson es el ratón MPTP lesionado 15. Si bien este modelo ha demostrado ser útil en la evaluación de los posibles agentes neuroprotectores 16, que es menos adecuado para la comprensión de los mecanismos subyacentes a los síntomas de la EP, ya que este modelo no suele inducir a los déficits motores, y muestra una gran variabilidad en la magnitud de la lesión 17, 18 .
Aquí hemos desarrollado un estable unilateral 6-OHDA lesionado modelo de ratón de la EP mediante la administración directa de 6-OHDA en el BMF, que de forma sistemática causa la pérdida> 95% de dopamina estriatal (medido por HPLC), así como producir el comportamiento los desequilibrios observados en el bien caracterizado modelo unilateral de ratas 6-OHDA lesionado de la EP. Este modelo de ratón de nuevo desarrollo de la EP será un valioso instrumento para comprender los mecanismos que subyacen a la generación de los síntomas parkinsonianos.
Protocol
Discussion
Este protocolo describe un método para la generación de un modelo estable unilateral ratón 6-OHDA lesionado de la enfermedad de Parkinson, que es extremadamente reproducibles, con una tasa de éxito lesión alta, y una baja tasa de mortalidad. El éxito de la cirugía lesión 6-OHDA se puede estimar fácilmente mediante la medición de comportamiento rotacional espontánea con rotaciones ipsiversive> 70% indicativos de> 95% la disminución de dopamina en el cuerpo estriado lesionado 27. La cuantifica…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el Departamento de Asuntos Exteriores y Comercio Internacional (Gobierno de Canadá), Universidad de Toronto Connaught Fondo, la Fundación Canadiense para la Innovación, NSERC, la Fundación Krembil y la confianza de Parkinson Cure.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| desipramine HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | D125 | 25mg/kg |
| pargyline HCl | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | P8013 | 5mg/kg |
| 6-OHDA HBr | Sigma-Aldrich, Oakville, ON, Canada | H116 | 3mg / mouse |
| stereotaxic Frame | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 900 | |
| mouse ear cups | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 921 Zygoma Ear Cups | |
| mouse incisor bar | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
| mouse anaesthesia mask | Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | Model 923B | |
| priming kit (containing 250ml syringe) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | PRMKIT 81120 | |
| RN compression fitting kit (1 mm) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55750-01 | |
| PEEK tubing from RN compression fitting kit< (1/16th inch) | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55751-01 | |
| dual small hub RN Coupler | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55752-01 | |
| luer to small hub RN adaptor | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 55753-01 | |
| 1ml 25S syringe model 7001KH | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 80100 | |
| *33G removable needle (RN) pack of 6. . Custom 1 inch with 45<° bevel | Hamilton Company, Reno, NV, USA | 7803-05 | |
| Scissors | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 14084-08 | |
| Scalpel | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10003-12 | |
| Scalpel blades | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 10035-20 | |
| Forcep | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 11608-15 | |
| Hemostats | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada. | 13004-14 | |
| Isoflurane | Abbot | 02241315 | 2-3% |
| Suters (Vicryl 4.0) | Syneture | SS-683 | |
| Steriliser | Fine Science Tools, Vancouver, BC, Canada | 18000-45 | |
| Infusion Pump | Harvard Apparatus | PhD 22/2000 | |
| Needles (27G) | Becton Dickinson | 305109 | |
| Needles (25G) | Becton Dickinson | 305127 | |
| Syringes (1ml) | BD syringe | 309692 | |
| Anaesthesia trolley | LEI medical | M2000 | |
| Baytril | CDMV, St. hyacinthe, QC | 102207 | |
| Lidocaine | CDMV, St. hyacinthe, QC | 3914 | |
| Betadine solution | CDMV, St. hyacinthe, QC | 19955 |
Referências
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