의 시각화 Caenorhabditis Elegans 표피 구조
Summary
우리는 사는 표피를 시각화하는 방법을 제시<em> C. elegans</em> 일반적으로 사용되는 적색 형광 염료 lipophilic DiI를 (1,1 '- dioctadecyl – 3, 3,3', 퍼클로레이트을 3'이 – tetramethylindocarbocyanine) 사용<em> C. elegans</em> 환경 노출된 뉴런을 시각화합니다. 이 최적화된 프로토콜로, alae와 환상 cuticular 구조 DiI로 얼룩진 및 복합 현미경을 사용하여 관찰하고 있습니다.
Abstract
C.의 표피 elegans는 동물 1-4 외관을 둘러싸는 매우 강한 구조입니다. 표피는 환경에서 동물을 보호뿐만 아니라 몸 모양을 결정하고 운동성 4-6에서 역할을뿐만 아니라. 표피 세포에 의해 분비 여러 레이어 바깥쪽의 지질 층 7 포함하여 표피를 구성.
표피의 주변 산등성이는 annuli 패턴 동물의 길이라는 개발 8 모든 단계 동안 존재하고 있습니다. Alae는 L1, dauer, 그리고 성인 단계 2,9를 포함하여 발달의 특정 단계 동안 존재하는 세로 능선입니다. cuticular 콜라겐 조직에 영향을 유전자에 돌연변 cuticular 구조와 동물 신체 형태 5,6,10,11을 변경할 수 있습니다. DIC 광학과 복합 현미경을 사용하여 cuticular 이미지가 강조 가능한, 현재 방법이지만 cuticular 구조 fluores 포함센트 transgene 표현 12, 항체 염색법 13, 그리고 전자 현미경 1. 분류 밀 배아 agglutinin (WGA)도 cuticular glycoproteins을 시각화하는 데 사용되었지만 미세한 cuticular 구조 14 해결 제한됩니다. 형광 염료를 사용하여 표면의 얼룩 cuticular을 준수하지만, 세부 15 특징 적이되었습니다. 우리는 살아 C로 표피를 시각화하는 방법을 제시 일반적으로 C로 사용되는 적색 형광 염료 lipophilic DiI를 (1,1 '- dioctadecyl – 3, 3,3', 퍼클로레이트을 3'이 – tetramethylindocarbocyanine) 사용 elegans elegans은 환경 노출 뉴런을 시각화합니다. DiI의 얼룩에 대한이 최적화된 프로토콜은 고해상도 형광 annuli의 시각화, alae, 외음부, 남성 꼬리, 그리고 C로 남녀 추니 꼬리 증가를위한 간단하고 강력한 방법입니다 elegans.
Protocol
Discussion
여기에 제시 DiI의 얼룩 방법은 C. elegans의 표피를 시각화하기 위해 상대적으로 신속하고 편리하게 얻을 수 있습니다. 일반적으로 이미지의 환경 노출 감각 뉴런 15,17하는 데 사용하는 방법을 repurposing 및 최적화함으로써, DiI는 찬란 alae와 환상 구조 (그림 1 및 2)뿐만 아니라 외음부, 남성 꼬리, 그리고 남녀 추니 꼬리 스파이크를 모두 얼룩하는 데 사용할 수 있습니다 (그림 3). 우리는 …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 S. Taneja – Bageshwar, K. Beifuss, S. Kedroske 및 HC 감사하고 싶습니다. 도움이 토론 샤오. 이 작품은 분자 및 세포 의학 TAMHSC학과에서 자금 업을 시작하여 기금을했다. 화합물 범위 및 회전 디스크는 부서와 학장의 TAMHSC 사무소에서 제공하는 자금을 구입했다. 일부 변종은 연구 자원을위한 국립 센터의 후원됩니다 Caenorhabditis 유전학 센터에 의해 제공되었다. pRF4 (rol – 6 (su1006)은) A. 화재의 선물했다.
Materials
| Reagents | Synonyms | Company | Catalogue number | Comments |
| DiI | 1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate | Biotium, Inc. | 60010 | Stock dilution: 20 mg/mL in DMF working dilution: 30 mg/mL |
| DMF | Dimethylformamide | Sigma-Aldrich, Inc. | D4551 | |
| Triton X-100 |
Octylphenoxypolyethoxyethanol | VWR International, LLC. | EM-9410 | |
| M9 | 22mM KH2PO4, 42mM Na2HPO4, 86mM NaCl, 1mM MgSO4 | |||
| NGM | Nematode growth medium | IPM Scientific, Inc. | 11006-501 | Can be prepared following NGM agar protocol18 |
| Agar-agar | EMD Chemicals, Inc. | 1.01614 | 4% in water | |
| Levamisole | Levamisole hydrochloride | Sigma-Aldrich, Inc. | 31742 | 100 μM – 1 mM levamisole as required |
| Microscope slides | VWR International, LLC. | 16005-106 | ||
| Microscope cover glasses | VWR International, LLC. | 16004-302 | ||
| Compound scope | Carl Zeiss, Inc. | A1m | Use objectives to match the needs of the experiment | |
| TRITC or other compatible filter | Chroma Technology Corp. | 49005 | ET – DSRed (TRITC/Cy3) sputtered filter set |
Referências
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