Adulto-nascido neurônios expressando ChR2 pode ser manipulado em preparações fatia eletrofisiológicos, a fim de examinar sua contribuição para a função olfativa de circuitos neurais.
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Artigo de método
Acessível usando Arrays LED para Foto Estimulação de Neurônios
Neste artigo
Resumo
Resumo
Eletrofisiologia fatia padrão tem permitido aos pesquisadores sondar os componentes individuais dos circuitos neurais gravando respostas elétricas de células individuais em resposta a elétrica ou farmacológica 1,2 manipulações. Com a invenção de métodos para controle de neurônios geneticamente opticamente alvo (optogenética), os pesquisadores agora têm um nível sem precedentes de controle sobre grupos específicos de neurônios na preparação fatia padrão. Em particular, fotossensível channelrodopsina-2 (ChR2) permite que os pesquisadores para ativar os neurônios com 3,4 luz. Ao combinar calibração cuidadosa de LED com base em fotoestimulação de ChR2 com eletrofisiologia fatia padrão, somos capazes de sonda com maior detalhe o papel de adulto-nascido interneurônios no bulbo olfativo, o primeiro relé central do sistema olfativo. Usando a expressão viral de ChR2-YFP especificamente no adulto-nascido neurônios, podemos controlar seletivamente jovens adultos-nascido neurônios em um ambiente de mais umd neurônios maduros. Nosso controle óptico usa um sistema simples e barato LED, e vamos mostrar como esse sistema pode ser calibrado para entender como muita luz é necessária para evocar spiking atividade de neurônios individuais. Por isso, lampejos de luz azul pode controlar remotamente o padrão de disparo de ChR2-transduzidas células recém-nascido.
Protocolo
1. Calibração óptico: Power LED de medição
- Anexar uma matriz de LEDs para um dissipador de calor ativa refrigerada por uma ventoinha e apor este aparato LED / dissipador de calor para uma lente colimadora.
- Troque a lâmpada usada em iluminação com LED brightfield / heatsink / fan / aparelho lente. Este aparelho deve ser cuidadosamente posicionado de modo que o feixe colimado LED viaja ao longo de um caminho reto em direção à lente óptica condensador. Verifique se o dissipador de calor / ventilador está devidamente aterrado para um terreno comum do sistema.
- Unidade de matriz LED com uma fonte de alimentação que pode dar pulsos rápidos e q....
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Discussão
Nos últimos anos temos visto uma explosão na popularidade de ferramentas para pesquisa em neurociência optogenetic 6. Como resultado, é cada vez mais importante para diminuir a barreira de entrada para laboratórios que desejam começar a usar estas novas ferramentas. Aqui nós descrevemos como conduzir uma adaptação simples e de baixo custo e calibração de um equipamento de patch-clamp convencionais, de modo que ele pode fazer de campo total estimulação óptica de channelrodopsina-expressando neurônios. Em parti.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pela empresa de seguros de vida "AG2R-La Mondiale-", Ecole des Neurociências de Paris (PEV), a Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-NEUR-004" no quadro de "NEURON ERA-NET "do 7 º PQ programa pela Comissão Europeia, e da Fundação Pasteur. Sebastien Wagner foi apoiado pela Fundação Letten.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Ketamina | Imalgène 1000 | 100 mg/ml | |
| Xilazina | Rompun | 2% | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S5886 | &nbps; |
| KCl | Sigma-Aldrich | P5405 | |
| MgSO4 | Sigma-Aldrich | M1880 | |
| NaHCO3 | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| NaHPO4 | Sigma-Aldrich | S5011 | |
| Glicose | Sigma-Aldrich | G7021 | |
| CaCl2 | Sigma-Aldrich | C7902 | |
| Agarose | Sigma-Aldrich | A9539 | |
| Pipetador | Sutter Instrument Co. | P-97 | |
| Capilares de vidro | Harvard Apparatus | GC150T-10 | 1,5 mm de diâmetro externo/1,17 mm de diâmetro interno |
| Matriz de LED | Bridgelux | BXRA-C2000 | |
| Lente colimadora | Thorlabs Inc. | LEDC1 | 40 mm de diâmetro do feixe |
| Fonte de alimentação | A1W Electronik | HKO2800 | 2,8 amp |
| Medidor de potência óptica | Thorlabs Inc. | PM 100 | |
| Dissipador de calor | Thermaltake | A1838 | Silent Boost K8 |
| Ventoinha | Thermaltake | A1838 | Silent Boost K8 |
| Vibrátomo | Leica Microsystems | VT1200S |
Referências
- Nissant, A. Adult neurogenesis promotes synaptic plasticity in the olfactory bulb. Nature Neuroscience. 12, 728-730 (2009).
- Apicella, A. Pyramidal Cells in Piriform Cortex Receive Convergent Input from Distinct Olfactory Bulb Glomer....
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Reimpressões e permissões
