Voksen-født neuroner udtrykker ChR2 kan manipuleres i skive elektrofysiologiske forberedelser for at undersøge deres bidrag til den funktion af olfaktoriske neurale kredsløb.
Standard skive elektrofysiologi har gjort det muligt forskere til at undersøge de enkelte komponenter i neurale kredsløb ved at optage elektriske svar af enlige celler som reaktion på elektrisk eller farmakologiske manipulationer 1,2. Med opfindelsen af metoder til optisk kontrol genetisk målrettet neuroner (optogenetics), nu har forskerne en hidtil uset grad af kontrol over specifikke grupper af neuroner i standarden skive forberedelse. Især giver lysfølsomt channelrhodopsin-2 (ChR2) forskere at aktivere neuroner med lys 3,4. Ved at kombinere omhyggelig kalibrering af LED-baserede photostimulation af ChR2 med standard skive elektrofysiologi, er vi i stand til at probe med flere detaljer rollen som voksen-fødte interneuroner i lugtekolben, den første centrale relæ af det olfaktoriske system. Brug af virale udtryk for ChR2-YFP specifikt i voksen-født neuroner, kan vi selektivt styre ung voksen-født neuroner i et miljø af ældre end modne neuroner. Vores optisk styring anvender en enkel og billig LED-system, og vi viser, hvordan dette system kan kalibreres til at forstå, hvor meget lys der er behov for at vække spiking aktivitet i en enkelt neuroner. Derfor kan korte glimt af blåt lys fjernbetjene affyringen mønster af ChR2-transduced nyfødte celler.
De seneste år er der sket en eksplosion i popularitet optogenetic værktøjer til neurovidenskab forskning 6. Som et resultat, er det stadig vigtigere at sænke barrieren for indrejse til laboratorier, der ønsker at begynde at bruge disse nye værktøjer. Her beskriver vi, hvordan man laver en enkel og billig renovering og kalibrering af en konventionel patch-clamp riggen, så det kan gøre fuld-field optisk stimulering af channelrhodopsin-udtrykkende neuroner. I særdeleshed, anvender vi denne teknik til s…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af livsforsikringsselskabet "AG2R-La Mondiale", Ecole des Neurovidenskaber de Paris (ENP), Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-NEUR-004" inden for rammerne af "ERA-NET NEURON "af 7. rammeprogram, som Europa-Kommissionen, og Pasteur Foundation. Sebastien Wagner blev støttet af Letten Foundation.
Material | Tipo | Company | Catalogue No. |
Ketamine | 100 mg/ml | Imalgène 1000 | |
Xylazine | 2% | Rompun | |
NaCl | &nbps; | Sigma | S5886 |
KCl | Sigma | P5405 | |
MgSO4 | Sigma | M1880 | |
NaHCO3 | Sigma | S5761 | |
NaHPO4 | Sigma | S5011 | |
Glucose | Sigma | G7021 | |
CaCl2 | Sigma | C7902 | |
Agarose | Sigma | A9539 | |
Pipette Puller | P-97 | Sutter | |
Glass Capillaries | 1.5 mm O.D./1.17 mm I.D. | Harvard Apparatus | GC150T-10 |
LED array | Bridgelux | BXRA-C2000 | |
Collimating lens | 40 mm beam diameter | Thor Labs | LEDC1 |
Power supply | 2.8 amp | A1W Electronik | HKO2800 |
Optical power meter | Thor Labs | PM 100 | |
Heatsink | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
Fan | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
Vibratome | Leica | VT1200S |