Utilizando asequible Estructuras de LED para fotos-estimulación de las neuronas
Summary
Adultos nacidos en las neuronas que expresan ChR2 puede ser manipulado en los preparativos rebanada electrofisiológicos para examinar su contribución a la función olfativa de los circuitos neuronales.
Abstract
Electrofisiología rebanada estándar ha permitido a los investigadores para probar los componentes individuales de los circuitos neuronales mediante el registro de las respuestas eléctricas de las células individuales en respuesta a las manipulaciones de 1,2 eléctrica o farmacológica. Con la invención de métodos para controlar ópticamente genéticamente las neuronas específicas (optogenética), los investigadores ahora tienen un nivel sin precedentes de control sobre grupos específicos de neuronas en la preparación rebanada estándar. En particular, fotosensibles canalrodopsina-2 (ChR2) permite a los investigadores para activar las neuronas con luz 3,4. Mediante la combinación de una cuidadosa calibración de LED basada en la fotoestimulación de ChR2 con electrofisiología rebanada estándar, se podrá analizar con mayor detalle el papel de los adultos nacidos en las interneuronas en el bulbo olfatorio, el primer relevo el centro del sistema olfativo. Utilizando la expresión viral de ChR2-YFP específicamente en los adultos nacidos en las neuronas, que pueden controlar de forma selectiva los adultos jóvenes nacidos en las neuronas en un entorno de mayores unad maduro neuronas. Nuestro control óptico utiliza un sistema sencillo y barato LED, y se muestra cómo este sistema puede ser calibrado para comprender cuánta luz se necesita para provocar picos de actividad de neuronas individuales. Por lo tanto, breves destellos de luz azul puede controlar a distancia el patrón de activación de las células transducidas ChR2-recién nacido.
Protocol
Discussion
En los últimos años han visto una explosión en la popularidad de las herramientas para la investigación en neurociencias optogenetic 6. Como resultado de ello, es cada vez más importante para reducir la barrera de entrada para los laboratorios que deseen comenzar a utilizar estas nuevas herramientas. A continuación se describe cómo llevar a cabo una adaptación fácil y barato y la calibración de un sistema convencional de patch-clamp plataforma para que pueda hacer todo el campo de la estimulación ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por la compañía de seguros de vida ", AG2R-La Mondiale-", Escuela de Neurociencias de París (PEV), la Agence Nationale de la Recherche "ANR-09-neur-004" en el marco de la "ERA-NET NEURON "del 7 º PM programa por la Comisión Europea y la Fundación Pasteur. Sebastien Wagner fue apoyada por la Fundación Letten.
Materials
| Material | Tipo | Company | Catalogue No. |
| Ketamine | 100 mg/ml | Imalgène 1000 | |
| Xylazine | 2% | Rompun | |
| NaCl | &nbps; | Sigma | S5886 |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| MgSO4 | Sigma | M1880 | |
| NaHCO3 | Sigma | S5761 | |
| NaHPO4 | Sigma | S5011 | |
| Glucose | Sigma | G7021 | |
| CaCl2 | Sigma | C7902 | |
| Agarose | Sigma | A9539 | |
| Pipette Puller | P-97 | Sutter | |
| Glass Capillaries | 1.5 mm O.D./1.17 mm I.D. | Harvard Apparatus | GC150T-10 |
| LED array | Bridgelux | BXRA-C2000 | |
| Collimating lens | 40 mm beam diameter | Thor Labs | LEDC1 |
| Power supply | 2.8 amp | A1W Electronik | HKO2800 |
| Optical power meter | Thor Labs | PM 100 | |
| Heatsink | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
| Fan | Silent Boost K8 | Thermaltake | A1838 |
| Vibratome | Leica | VT1200S |
Referências
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