Modello murino di endometriosi chirurgicamente indotto da Auto-trapianto di tessuto uterino
Summary
Una descrizione della induzione chirurgica di endometriosi in topi e ratti con auto-trapianto di tessuto uterino alla cascata delle arterie del mesentere intestinale.
Abstract
L'endometriosi è una malattia cronica, dolorosa malattia la cui eziologia rimane sconosciuta. Inoltre, il trattamento di endometriosi può richiedere la rimozione laparoscopica delle lesioni, e / o croniche gestione farmaceutica del dolore e dei sintomi infertilità. Il costo associato con endometriosi è stato stimato a 22 miliardi di dollari all'anno negli Stati Uniti 1. Per ulteriormente la nostra comprensione dei meccanismi alla base di questa malattia enigmatica, i modelli animali sono stati impiegati. Primati sviluppano spontaneamente endometriosi e quindi modelli di primati più simili alla malattia nelle donne. Modelli di roditori, tuttavia, sono più convenienti e facilmente reperibili 2. Il modello che abbiamo descritto qui comporta un trasferimento autologo di tessuto uterino al mesentere intestinale (Figura 1) ed è stato sviluppato nel ratto 3 e poi trasferito al mouse 4. L'obiettivo del modello roditore autologo di endometriosi chirurgicamente indotta è quella di imitarela malattia nelle donne. Noi e altri hanno già dimostrato che l'alterato pattern di espressione genica osservata nelle lesioni endometriosiche da topi o ratti rispecchia quella osservata nelle donne con la malattia 5,6. Uno dei vantaggi del realizzare l'intervento nel topo è che l'abbondanza di ceppi di topi transgenici disponibile può aiutare i ricercatori a determinare il ruolo di specifici componenti importanti nella creazione e la crescita di endometriosi. Un modello alternativo in cui vengono introdotti asportati frammenti umani endometriale al peritoneo di topi immunocompromessi è anche ampiamente utilizzato, ma è limitata dalla mancanza di un normale sistema immunitario che si ritiene essere importante per l'endometriosi 2,7. È importante sottolineare che il modello murino di endometriosi indotta chirurgicamente è un modello versatile che è stato utilizzato per studiare come il sistema immunitario 8, 9,10 ormoni e fattori ambientali influenzano 11,12 endometriosi così come gli effetti dell'endometriosi sulla Fertility 13 e il dolore 14.
Protocol
Discussion
Ci sono diversi parametri critici che dovrebbero essere notato durante l'esecuzione l'induzione chirurgica di endometriosi nei topi. In primo luogo, l'endometriosi è una malattia estrogeno-dipendenti e come tale questo tipo di chirurgia deve essere eseguita nell'animale intatto o in alternativa negli animali ovariectomizzati integrato con estrogeni 20. In secondo luogo, la sutura biopsie endometriali alla cascata arteriosa deve essere eseguita con estrema cura. Abbiamo scoperto che usando sol…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Un ringraziamento speciale a Chris Kassotis e Audrey Bailey per la revisione critica di questo manoscritto e il Dr. Scott Korte, Giuseppe Beeman, Alison Curfman, Paul Kimball, Bridget Neibreggue, Jacob Redel, Amy Schroder, Maija Steinberg, e Stacey Winkeler per la loro assistenza per l'ottimizzazione di questo modello nel nostro laboratorio. Il finanziamento è stato fornito dalla formazione di Grant Clinica Biodetectives (NIH T90) (Kep), Università del Missouri Scienze della Vita Undergraduate Research Program Opportunità, MU Research Council, MU Assegni di ricerca Board e NIH R21HD056441 (SCN).
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number |
| Wax pencil | Fisher | NC9954135 |
| Glass slide | Fisher | 12-550-433 |
| Eyedropper | Fisher | S79383 |
| Standard light microscope for evaluating vaginal cytology smears | ||
| Buprenorphine HCL c3 (CARJET) 10X1ml | Butler Animal Health Supply | 022891 |
| Sterile phosphate buffered saline (PBS) | Gibco | 14040-117 |
| 10,000U/ml Penicillin, 10,000μg/ml Streptomycin in 0.85% NaCl | Hyclone | SV30010 |
| Isoflurane | Abbott Animal Health | 05260-05 |
| Isoflurane non-rebreathing anesthetic system | ||
| Recirculating hot water heating pad | ||
| 30 ml syringe sheath | Fisher | 14-823-16G |
| Powder free sterile gloves | Fisherbrand | 19020558 |
| Ophthalmic ointment | Major Pharmaceuticals | 10033691 |
| Small electrical clippers | Wahl | 9861-600 |
| Chlorhexidine scrub | Fisher | NC9863042 |
| 70% Ethanol | ||
| Polylined sterile field | Busse Hospital Disposables | 696 |
| Size 3 scalpel | Fisher | 22-079-657 |
| Number 10 scalpel blades | Fisher | 22-079-681 |
| Small surgical scissors | Roboz | RS-5850 |
| Small serrated semi-curved forceps | Roboz | RS-5135 |
| 5-0 black braided silk suture | Ethicon | K870H |
| Sterilized pyrex glass Petri dishes | Corning | 70160-101 |
| 2 mm biopsy punch | Miltex | 33-31 |
| Sterile gauze | Kendall | 1806 |
| 6-0 black monofilament ethilon nylon suture | Ethicon | 697G |
| Needle drivers (optional) | World Precision Instruments | 500023 |
| 5-0 undyed braided coated vicryl suture | Ethicon | J490G |
| 9mm Autoclip wound clips | Becton Dickinson | 427631 |
| Autoclip applier & remover | Becton Dickinson | 427630 |
| 23G needle | Becton Dickinson | 305193 |
| 1cc syringe | Becton Dickson | 301025 |
| 5X magnifying glass stand (optional) | Fisher | 14-648-23 |
| 10% Buffered formalin | Fisher | SF100-4 |
| Calipers | Roboz | RS-6466 |
| Processing/embedding cassettes | Fisher | 15-197-700A |
| Biopsy foam pads | Fisher | 22-038-222 |
| RNAqueous RNA isolation kit | Ambion | AM1912 |
| Liquid nitrogen | ||
| Snap cap microcentrifuge flat top tube | Fisher | 02-681-240 |
| Ketamine (optional) | Simga | K4138 |
| Domitor (medetomidine hydrochloride) (optional) | Tocris | 2023 |
| Antisedan (atipamezole) (optional) | Sigma | A9611 |
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