Modelo do rato de endometriose cirurgicamente induzida pela Auto-transplante de tecido uterino
Summary
Uma descrição da indução cirúrgica de endometriose em camundongos e ratos por auto-transplante de tecido do útero para a cascata arterial do mesentério intestinal.
Abstract
A endometriose é uma doença crônica e dolorosa cuja etiologia permanece desconhecida. Além disso, o tratamento da endometriose pode exigir a remoção laparoscópica de lesões e / ou gestão farmacêutica crônico de dor e os sintomas de infertilidade. O custo associado com endometriose tem sido estimado em 22 bilhões de dólares por ano nos Estados Unidos 1. Para continuar a nossa compreensão dos mecanismos subjacentes a esta doença enigmática, modelos animais têm sido empregados. Primatas espontaneamente desenvolver endometriose e, portanto, modelos de primatas mais semelhantes ao da doença em mulheres. Modelos de roedores, no entanto, são mais rentáveis e prontamente disponíveis 2. O modelo que descrevemos aqui envolve uma transferência autólogo de tecido uterino ao mesentério intestinal (Figura 1) e foi desenvolvido pela primeira vez no rato 3 e mais tarde transferido para o mouse 4. O objetivo do modelo de roedor autólogo de endometriose cirurgicamente induzida é imitarda doença em mulheres. Nós e os outros já haviam demonstrado que o padrão de expressão alterada do gene observada em lesões de endometriose de camundongos ou ratos espelhos que a observada em mulheres com a doença 5,6. Uma vantagem de realizar a cirurgia em ratos é que a abundância de linhagens de camundongos transgênicos disponíveis podem ajudar os pesquisadores a determinar o papel de componentes específicos importantes no estabelecimento e crescimento da endometriose. Um modelo alternativo no qual excisadas humana fragmentos do endométrio são introduzidos no peritônio de ratos imunocomprometidos também é amplamente utilizada, mas é limitado pela falta de um sistema imunológico normal que é pensado para ser importante na endometriose 2,7. Importante, o modelo do rato da endometriose induzida cirurgicamente é um modelo versátil, que tem sido usado para estudar como o sistema imunológico 8, 9,10 hormônios e fatores ambientais afetam 11,12 endometriose, bem como os efeitos da endometriose sobre fertility 13 e 14 a dor.
Protocol
Discussion
Existem vários parâmetros críticos que devem ser observadas durante a realização da indução cirúrgica de endometriose em camundongos. Primeiro, a endometriose é uma doença estrogênio dependente e, como tal, esta cirurgia deve ser realizada em animais intactos ou, alternativamente, em animais ovariectomizados suplementado com estrógenos 20. Segundo, suturar as biópsias endometriais para a cascata arterial deve ser realizada com extremo cuidado. Nós descobrimos que o uso de apenas dois nós relati…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecimentos especiais a Chris Bailey Kassotis e Audrey para a revisão crítica do manuscrito e ao Dr. Scott Korte, Beeman Joseph, Curfman Alison, Kimball Paulo, Neibreggue Bridget, Redel Jacob, Schroder Amy, Steinberg Maija e Winkeler Stacey, o auxílio na otimização deste modelo em nosso laboratório. O financiamento foi fornecido pela Clínica Biodetectives Training Grant (NIH T90) (KEP), University of Missouri Life Sciences Research Graduação Programa de Oportunidades, Pesquisa MU Conselho, Research Board MU subvenções e R21HD056441 NIH (SCN).
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number |
| Wax pencil | Fisher | NC9954135 |
| Glass slide | Fisher | 12-550-433 |
| Eyedropper | Fisher | S79383 |
| Standard light microscope for evaluating vaginal cytology smears | ||
| Buprenorphine HCL c3 (CARJET) 10X1ml | Butler Animal Health Supply | 022891 |
| Sterile phosphate buffered saline (PBS) | Gibco | 14040-117 |
| 10,000U/ml Penicillin, 10,000μg/ml Streptomycin in 0.85% NaCl | Hyclone | SV30010 |
| Isoflurane | Abbott Animal Health | 05260-05 |
| Isoflurane non-rebreathing anesthetic system | ||
| Recirculating hot water heating pad | ||
| 30 ml syringe sheath | Fisher | 14-823-16G |
| Powder free sterile gloves | Fisherbrand | 19020558 |
| Ophthalmic ointment | Major Pharmaceuticals | 10033691 |
| Small electrical clippers | Wahl | 9861-600 |
| Chlorhexidine scrub | Fisher | NC9863042 |
| 70% Ethanol | ||
| Polylined sterile field | Busse Hospital Disposables | 696 |
| Size 3 scalpel | Fisher | 22-079-657 |
| Number 10 scalpel blades | Fisher | 22-079-681 |
| Small surgical scissors | Roboz | RS-5850 |
| Small serrated semi-curved forceps | Roboz | RS-5135 |
| 5-0 black braided silk suture | Ethicon | K870H |
| Sterilized pyrex glass Petri dishes | Corning | 70160-101 |
| 2 mm biopsy punch | Miltex | 33-31 |
| Sterile gauze | Kendall | 1806 |
| 6-0 black monofilament ethilon nylon suture | Ethicon | 697G |
| Needle drivers (optional) | World Precision Instruments | 500023 |
| 5-0 undyed braided coated vicryl suture | Ethicon | J490G |
| 9mm Autoclip wound clips | Becton Dickinson | 427631 |
| Autoclip applier & remover | Becton Dickinson | 427630 |
| 23G needle | Becton Dickinson | 305193 |
| 1cc syringe | Becton Dickson | 301025 |
| 5X magnifying glass stand (optional) | Fisher | 14-648-23 |
| 10% Buffered formalin | Fisher | SF100-4 |
| Calipers | Roboz | RS-6466 |
| Processing/embedding cassettes | Fisher | 15-197-700A |
| Biopsy foam pads | Fisher | 22-038-222 |
| RNAqueous RNA isolation kit | Ambion | AM1912 |
| Liquid nitrogen | ||
| Snap cap microcentrifuge flat top tube | Fisher | 02-681-240 |
| Ketamine (optional) | Simga | K4138 |
| Domitor (medetomidine hydrochloride) (optional) | Tocris | 2023 |
| Antisedan (atipamezole) (optional) | Sigma | A9611 |
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