इलेक्ट्रिक फील्ड नियंत्रित 2 डी और 3 डी वातावरण में तंत्रिका कोशिकाओं पूर्वज निर्देशित प्रवासन
Summary
इस प्रोटोकॉल के लिए कस्टम डिजाइन electrotactic कक्षों में 2 डी और 3 डी वातावरण स्थापित तरीकों का इस्तेमाल किया है, जो कोशिकाओं को ट्रैक कर सकते हैं दर्शाता है<em> Vivo में / पूर्व vivo में</em> एकल कोशिका के स्तर पर समय चूक रिकॉर्डिंग का उपयोग कर, आदेश में galvanotaxis / electrotaxis और अन्य सेलुलर प्रतिक्रियाओं की जांच करने के लिए वर्तमान (डीसी) बिजली क्षेत्र (EFS) प्रत्यक्ष.
Abstract
अंतर्जात बिजली क्षेत्र (EFS) vivo में प्राकृतिक रूप से पाए जाते हैं और ऊतक / अंग विकास और उत्थान के दौरान एक महत्वपूर्ण भूमिका है कि केंद्रीय तंत्रिका प्रणाली 1,2 सहित, खेलते हैं. इन अंतर्जात EFS ईओण कोशिकाओं और ऊतकों के विद्युत प्रतिरोध के साथ संयुक्त परिवहन के सेलुलर विनियमन द्वारा उत्पन्न कर रहे हैं. यह बताया गया है कि लागू एफई उपचार पशुओं और मनुष्यों 3,4 में रीढ़ की हड्डी की चोट के कार्य की मरम्मत को बढ़ावा कर सकते हैं. विशेष रूप में, एफई निर्देशित सेल प्रवास सहित तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं 7,8 (NPCs), सेल 5,6 प्रकार की एक विस्तृत विविधता में प्रदर्शन किया गया है. प्रत्यक्ष वर्तमान (डीसी) EFS के आवेदन ज्यादातर प्रयोगशालाओं में सामान्य रूप से उपलब्ध तकनीक नहीं है. कि हम डीसी EFS के आवेदन के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल सेल और ऊतक संस्कृतियों 5,11 पहले से वर्णित किया है. यहाँ हम मानक तरीकों में से एक वीडियो प्रदर्शन एक परिकलित फ़ील्ड करने के लिए 2 डी एक सेट की शक्ति पर आधारित प्रस्तुतNPCs के लिए 3 डी वातावरण, और 2d में दोनों एक सेल के विकास की स्थिति में एफई उत्तेजना, और organotypic 3 डी में रीढ़ की हड्डी का टुकड़ा करने के लिए सेलुलर प्रतिक्रियाओं की जांच की. रीढ़ की हड्डी cordslice एनपीसी पूर्व vivo व्यवहार के बाद प्रत्यारोपण, अध्ययन है क्योंकि cytoarchitectonic ऊतक संगठन इन 9,10 संस्कृतियों के भीतर अच्छी तरह से संरक्षित है के लिए एक आदर्श प्राप्तकर्ता ऊतक है. इसके अतिरिक्त, इस पूर्व vivo मॉडल भी प्रक्रियाओं है कि तकनीकी रूप से संभव एकल कोशिका के स्तर पर समय चूक रिकॉर्डिंग का उपयोग vivo में कोशिकाओं को ट्रैक नहीं कर रहे हैं अनुमति देता है. यह गंभीर न केवल एक 2d वातावरण में सेल के व्यवहार का मूल्यांकन आवश्यक है, लेकिन यह भी एक 3 डी organotypic हालत जो vivo वातावरण में mimicks में है. इस प्रणाली की अनुमति देगा उच्च संकल्प ऊतक या अंग संस्कृति इन विट्रो और पूर्व vivo में एक सेल प्रवास के 3 डी ट्रैकिंग के साथ कवर गिलास आधारित व्यंजन का उपयोग और इमेजिंग छह में पर चलती से पहले एक मध्यवर्ती कदम हो सकता हैवो मानदंड.
Protocol
Discussion
प्रोटोकॉल का उपयोग हम पिछले 5,11 अध्ययन पर आधारित हैं. इन विधियों का प्रयोग, स्थिर संस्कृति और बिजली की मौजूदा परिस्थितियों जबकि एक EF अगर पुलों, स्टाइनबर्ग समाधान, और कस्टम डिजाइन मानकीकृत और सटीक आय?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम के रॉयल सोसाइटी URF UF051616 अनुदान, ब्रिटेन और यूरोपीय अनुसंधान परिषद STG बी एस 243,261 अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था. MZ प्रयोगशाला में काम भी पुनर्योजी चिकित्सा RB1 01,417 अनुदान के कैलिफोर्निया संस्थान द्वारा समर्थित है.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| FGF-basic Recombinant Human | Invitrogen | PHG0026 | 20 ng/mL |
| EGF Recombinant Human | Invitrogen | PHG0311 | 20 ng/mL |
| N2-Supplement (100X) liquid | Invitrogen | 02048 | |
| DMEM/F12 medium (high glucose) | Invitrogen | 31330-095 | |
| Poly-D-Lysine | Millipore | A-003-E | |
| Natural mouse Laminin | Invitrogen | 23017-015 | |
| Growth factor reduced Basement Membrane Matrix (Matrigel) | B.D. Biosciences | 354230 | |
| HEPES buffer | Gibco | 15630 | |
| McIlwain tissue chopper | The Mickle Laboratory Engineering Co Ltd | TC752-PD | |
| Dow Corning high-vacuum silicone grease | Sigma-Aldrich | Z273554 |
Referências
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