Met behulp van fast-scan cyclische voltammetrie elektrisch opgeroepen presynaptische dopamine dynamiek te meten in de hersenen striatale plakjes.
Uitgebreid onderzoek heeft zich gericht op de neurotransmitter dopamine, omdat het belang ervan in het werkingsmechanisme van drugs (bv cocaïne en amfetamine), de rol die het speelt in psychiatrische ziekten (zoals schizofrenie en Attention Deficit Hyperactivity Disorder), en haar betrokkenheid bij degeneratieve aandoeningen zoals Parkinson en de ziekte van Huntington. Onder normale fysiologische omstandigheden, is dopamine bekend locomotorische activiteit, cognitie, leren, emotionele invloed op, en neuro-endocriene hormoon secretie reguleren. Een van de grootste dichtheid van dopamine neuronen is in het striatum, die kan worden opgedeeld in twee verschillende neuroanatomische regio bekend als de nucleus accumbens en de caudate-putamen. Het doel is om een algemeen protocol voor slice fast-scan cyclische voltammetrie (FSCV) illustreren binnen de muis striatum. FSCV is een goed gedefinieerd elektrochemische techniek biedt de mogelijkheid om dopamine afgifte en opname te meten in real-time in discrete hersengebieden. Carbon fiber micro-elektroden (diameter van ~ 7 um) worden gebruikt in FSCV om dopamine oxidatie te detecteren. De analytische voordeel van het gebruik FSCV aan dopamine te detecteren is de verbeterde temporele resolutie van 100 milliseconden en ruimtelijke resolutie van minder dan tien micrometer, die aanvullende gegevens in vivo microdialyse.
Het protocol hier gepresenteerde laat zien hoe voor te bereiden en de muis coronale de hersenen plakjes te gebruiken voor FSCV experimenten. Hoewel deze methode is specifiek voor het verkrijgen en het meten van dopamine dynamiek, andere neurotransmitters zoals adenosine, hebben waterstofperoxide, noradrenaline en serotonine zijn gemonitord in vivo of in vitro met FSCV 3, 8 – 11. FSCV kan worden gebruikt om sommige van deze andere neurotransmitters monitor door eenvoudige aanpassingen van de …
The authors have nothing to disclose.
Financiering door het National Institute on Alcohol Abuse en Alcoholism (NIAAA, AA-016967 en AA016967-01S1, TAM), Wayne State University opstarten fondsen, en Wayne State University Research Grant Program. De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet de officiële standpunten van NIAAA of de National Institutes of Health.
Name | Company | CAS number |
Reagent |
||
Potassium Chloride |
Fisher | 7447407 |
Sodium chloride |
EMD Chemicals | 7647145 |
Magnesium chloride |
Fisher |
7791186 |
Calcium chloride |
Fisher |
10035048 |
Sodium bicarbonate |
EMD Chemicals |
144558 |
Sodium phosphate,Dibasic |
EMD Chemicals |
7558794 |
D-glucose |
Fisher |
50997 |
Ascorbic acid |
Fisher |
50817 |
Sucrose |
Fisher |
57501 |
|
|
|
Materials |
Vendor |
Catalogue number |
Carbon fiber |
Goodfellow Oakdale, PA | |
Glass capillary |
A-M Systems Carlsborg WA. | 602000 |
Silver wire |
A-M Systems Carlsborg WA. | 787000 |
Tungsten stimulating electrode |
Plastics One, Roanoke, VA | |
Platinum wire |
||
Lead wire |
Squires Electronics, Cornelius, OR | |
Loctite 404 instant adhesive |
Hankal Corp. Rocky Hill CT. |
|
Razor blade |
World precision Instruments Inc. FL. | |
BD Spinal needle |
BD Medical systems, Franlin Lake, NJ |
REF 405234 |
Surgical Blade |
Feather Safety razor Co. LTD. Japan | |
|
||
Software |
Vendor |
Catalogue number |
TH software |
ESA Inc.,Chelmsford, MA | |
Instrument |
Vendor |
Catalogue number |
Submersion recording chamber |
Custom Scientific, Denver, CO | |
Neorolog stimulus isolator |
Digitmeter, Hertfordshire, England | |
Automatic temperature controller |
Warner Instrument Corporation | |
Microscope (SZX7) |
Olympus | |
Microscope |
Fisher | |
Vibratome 3000 sectioning system |
St. Louis , MO. | |
Perfusion pump |
Watson Marlow Limited, Falmouth Cornwall – England | H110708 |
Micropipette puller |
Narishige, Tokyo, Japan | |
ChemClamp potentiostat |
Dagan Corporations, Minneapolis, MN. |