Usando fast-scan voltametria cíclica para medir eletricamente evocado dinâmica pré-sinápticos em fatias de cérebro estriado.
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Artigo de método
Pré-sináptica de dopamina Dynamics em fatias de cérebro estriado com Fast-scan voltametria cíclica
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Extensa pesquisa centrou-se no neurotransmissor dopamina devido à sua importância no mecanismo de ação das drogas de abuso (por exemplo, cocaína e anfetaminas), o papel que ela desempenha nas doenças psiquiátricas (por exemplo, esquizofrenia e Déficit de Atenção e Hiperatividade), e seu envolvimento na degenerativas doenças como mal de Parkinson e doença de Huntington. Em condições fisiológicas normais, a dopamina é conhecida por regular a atividade locomotora, cognição, aprendizagem, afetam emocional e secreção de hormônios neuroendócrinos. Uma das maiores densidades de neurônios de dopamina está dentro do corpo estriado, que pode ser dividido em duas distintas regiões neuroanatômicas conhecida como nucleus accumbens eo núcleo caudado-putamen. O objetivo é ilustrar um protocolo geral para a fatia de voltametria cíclica fast-scan (FSCV) dentro do striatum mouse. FSCV é um bem definidas técnica eletroquímica proporcionando a oportunidade de medir a liberação de dopamina e absorção em tempo real em dregiões do cérebro iscrete. Microeletrodos de fibra de carbono (diâmetro de ~ 7 mm) são usados em FSCV para detectar oxidação da dopamina. A vantagem analítica de utilizar FSCV para detectar a dopamina é a sua resolução melhorada temporal de 100 milissegundos e resolução espacial de menos de dez microns, fornecendo informações complementares no microdiálise in vivo.
Protocolo
1. Fundamentos experimentais
Fabricação de eletrodos
- Existem inúmeros microeletrodos de fibra de carbono métodos de fabricação mais uma vez são feitas in-house. Normalmente o que determina os detalhes de fabricação de eletrodos é a técnica eletroquímica que é aplicada ao eletrodo (por exemplo, amperometria vs FSCV). Para FSCV, microeletrodos podem ser feitas em casa usando o procedimento de três etapas seguintes. Para uma descrição mais completa de carbono de fabricação de eletrodos de fibra, ver um artigo recente JOVE 1. No entanto, note que os eletrodos descritos abaixo são microeletrodos de carbono cilí....
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Discussão
O protocolo apresentado aqui demonstra como preparar e usar fatias do mouse coronal do cérebro para experimentos FSCV. Embora este método é específico para obtenção e medição dinâmica da dopamina, outros neurotransmissores, como a adenosina, peróxido de hidrogênio, noradrenalina e serotonina têm sido monitoradas in vivo ou in vitro com FSCV 3, 8-11. FSCV pode ser usado para monitorar algumas dessas substâncias neuroquímicas outros por simples modificações da forma de onda aplicada ao eletrod.......
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Divulgações
Não há conflitos de interesse declarados.
Agradecimentos
Financiamento fornecido pelo Instituto Nacional de Abuso do Álcool e Alcoolismo (NIAAA; AA-016967 e AA016967-01S1; TAM), Wayne State University arranque fundos, e Wayne State University Program Research Grant. O conteúdo é da exclusiva responsabilidade dos autores e não representam a posição oficial da NIAAA ou o National Institutes of Health.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Nome | Companhia | Número CAS | |
Reagente | |||
Cloreto de Potássio | Pescador | 7447407 | |
Cloreto de sódio | Merck Química | 7647145 | |
Cloreto de magnésio | Pescador | 7791186 | |
Cloreto de cálcio | Pescador | 10035048 | |
Bicarbonato de sódio | Merck Química | 144558 | |
Fosfato de sódio, dibásico | EMD Chemicals | 7558794 | |
D-glucose | Pescador | 50997 | |
Ácido ascórbico | Pescador | 50817 | |
Sacarose | Pescador | 57501 | |
|
| ||
Materiais | Vendedor | Número de catálogo | |
Fibra de carbono | Goodfellow Oakdale, PA | ||
Capilar de vidro | AM Sistemas Carlsborg WA. | 602000 | |
Fio de prata | A-M Sistemas Carlsborg WA. | 787000 | |
Eletrodo de tungstênio estimulando | Um plásticos, Roanoke, VA | ||
Fio de platina | |||
Do cabo | Squires Electronics, Cornelius, OR | ||
Loctite adesivo instantâneo 404 | Hankal Corp Rocky Hill CT. | ||
Gilete | Mundial de precisão Instruments Inc. FL. | ||
BD Spinal agulha | Sistemas de BD Medical, Franlin Lake, NJ | REF 405234 | |
Lâmina cirúrgica | Feather Safety razor Co. LTD. Japão | ||
Software | Vendedor | Número de catálogo | |
Software TH | ESA Inc., Chelmsford, MA | ||
Instrumento | Vendedor | Número de catálogo | |
Câmara de gravação de submersão | Personalizado Científico, Denver, CO | ||
Neorolog isolador de estímulo | Digitmeter, Hertfordshire, Inglaterra | ||
Controlador de temperatura automático | Warner Instrument Corporation | ||
Microscópio (SZX7) | Olimpo | ||
Microscópio | Pescador | ||
Vibratome sistema de seccionamento 3000 | St. Loué, MO. | ||
Bomba de perfusão | Watson Marlow Limited, Falmouth Cornualha - Inglaterra | H110708 | |
Micropipeta extrator | Narishige, Tóquio, Japão | ||
ChemClamp potenciostato | Corporações Dagan, Minneapolis, MN. |
Referências
- Pike, C. M., Grabner, C. P., Harkins, A. B. Fabrication of Amperometric Electrodes. J. Vis. Exp. (27), e1040-e1040 (2009).
- Lack, A. K., Diaz, M. R., Chappell, A., DuBois, D. W., McCool, B. A. Chronic ethanol and withdrawal differentially modulate pre- a....
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Reimpressões e permissões
