صب وتشغيل جل البروتين عن طريق إعادة استخدام شرائط التجاري
Summary
بروتوكول لدينا يوضح كيفية صب المواد الهلامية بروتين متعددة في وقت واحد بواسطة Nupage إعادة تدوير أشرطة إينفيتروجن minigel Novex، ومواد غير مكلفة شراؤها في منزل تحسين تخزين. هذه الطريقة اقتصادية ويشمل تبسيط وسيلة لتخزين المواد الهلامية في 4 درجة مئوية لمدة بضعة أسابيع. ويمكن من خلال إعادة استخدام الأشرطة هلام البلاستيك من المواد الهلامية المتاحة تجاريا، ومختبرات المواد الهلامية التي تعمل بروتين متكرر توفير تكاليف كبيرة ويساعد في تحسين البيئة.
Abstract
تقييم البروتينات باستخدام كبريتات الصوديوم بولكرلميد دوديسيل الهلام الكهربائي (SDS-PAGE) التحليل هو التقنية المستخدمة من قبل الباحثين الكيمياء الحيوية والبيولوجيا الجزيئية 1-4. بالنسبة للمختبرات التي تقوم بإجراء التحاليل اليومية من البروتينات، يمكن أن تكلفة المواد الهلامية بولكرلميد المتاحة تجاريا (~ $ 10/gel) أن تكون كبيرة بمرور الوقت. للتخفيف من هذه التكاليف، وبعض الباحثين تعد المواد الهلامية التي بولكرلميد الخاصة. الطرق التقليدية في صب هذه المواد الهلامية تستخدم عادة المعدات المتخصصة وألواح الزجاج هلام التي يمكن أن تكون باهظة الثمن ويحول دون صب المواد الهلامية كثير وتخزينها لاستخدامها في المستقبل. وعلاوة على ذلك، يمكن التعامل مع لوحات من الزجاج أثناء التنظيف أو هلام صب يؤدي إلى كسر عرضي خلق يشكل خطرا على السلامة، والتي قد تحول دون استخدامها في الصفوف الجامعية مختبر. بروتوكول لدينا يوضح كيفية صب المواد الهلامية بروتين متعددة في وقت واحد بواسطة Nupage إعادة تدوير أشرطة إينفيتروجن minigel Novex، وماجستير غير مكلفةاستنباط مواد تم شراؤها في منزل تحسين تخزين. هذه الطريقة اقتصادية ويشمل تبسيط وسيلة لتخزين المواد الهلامية في 4 درجة مئوية لمدة بضعة أسابيع. ويمكن من خلال إعادة استخدام الأشرطة هلام البلاستيك من المواد الهلامية المتاحة تجاريا، ومختبرات المواد الهلامية التي تعمل بروتين متكرر توفير تكاليف كبيرة ويساعد في تحسين البيئة. وبالإضافة إلى ذلك، والأشرطة هلام البلاستيك هي مقاومة جدا للكسر، الأمر الذي يجعلها مثالية لقاعات الدراسة الجامعية مختبر.
Protocol
Discussion
بروتين الكهربائي للهلام هو وسيلة لا غنى عنها للمختبرات البيولوجيا الجزيئية الأكثر. minigels المتاحة تجاريا توفير مستوى عال من الراحة، ولكن يمكن أن يكون مكلفا. هنا نبين كيفية إعادة استخدام الأشرطة minigel من ماركة شعبية من minigels متاحة تجاريا. هذا الأسلوب يحتفظ الراحة من وجود …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الكتاب أشكر معهد هوارد هيوز الطبي لعلوم الحياة الجبهة المتحدة للمشاركة في الجائزة إلى AH
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
Referências
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
