Ein experimentelles System, um Mechanotransduktion in fetalen Lunge Zellen zu untersuchen
Summary
Mechanische Kräfte spielen eine Schlüsselrolle in der Entwicklung und Lunge Lungenversagen. Hier beschreiben wir eine Methode, um Nager fetalen Lunge Typ II Epithelzellen und Fibroblasten zu isolieren und sie auf mechanische Stimulation mit ein Exposé<em> In-vitro-</em> System.
Abstract
Mechanische Kräfte in der Gebärmutter mit sich wiederholenden Bewegungen wie Atmung-und Spannungsgefühl durch Flüssigkeit erzeugt werden, sind entscheidend für die normale Entwicklung der Lunge. Ein wesentlicher Bestandteil der Entwicklung der Lunge ist die Differenzierung der alveolaren Typ II Epithelzellen, die Hauptquelle der pulmonalen Surfactant. Diese Zellen auch in Flüssigkeitshomöostase Teilnahme an der Alveolarlumen, Immunabwehr und zu reparieren. Darüber hinaus können distalen Lungenparenchym Zellen direkt auf übertriebene Dehnung werden während der mechanischen Beatmung ausgesetzt nach der Geburt. Allerdings sind die genauen molekularen und zellulären Mechanismen, durch die Lungenzellen spüren, mechanische Reize, um die Entwicklung der Lunge zu beeinflussen und zu fördern Lungenschädigung nicht vollständig verstanden. Hier bieten wir eine einfache und hoher Reinheit Methode, um Typ-II-Zellen und Fibroblasten von Nagern fetalen Lunge zu isolieren. Dann beschreiben wir ein in vitro System, das Flexcell Dehnungseinheit, auf mechanische Reize, um fötale Zellen liefern, die Simulation mechanischer Kräfte infetalen Lunge Entwicklungs-oder Lungenversagen. Dieses experimentelle System bietet ein ausgezeichnetes Werkzeug, um molekulare und zelluläre Mechanismen der fetalen Lunge ausgesetzten Zellen strecken zu untersuchen. Mit diesem Ansatz hat sich unser Labor mehrere Rezeptoren und Signalproteine, die in der Mechanotransduktion Teilnahme an fetalen Lunge Entwicklung und Lungenschädigung identifiziert.
Protocol
Discussion
In diesem Manuskript, beschreiben wir eine Methode zur fetalen Typ-II-Epithelzellen und Fibroblasten zu isolieren und sie auf mechanische Stimulation mit dem Apparat Flexcell Stamm freizulegen. Wir haben diese Technik verwendet, um Differenzierung von Epithelzellen zu bewerten und 1,2-Rezeptor und Signalwege durch Dehnung 3-9 aktiviert zu studieren. Darüber hinaus kann dieses Verfahren auch verwendet werden, um Zell-Reaktionen durch mechanische Verletzung 10,11 induziert werden wird. Da…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Unterstützt von NIH HD052670.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| DMEM | Sigma | D5648 | |
| HEPES | Sigma | H3375 | |
| Collagenase 1 | Sigma | C0130 | |
| Collagenase 1A | Sigma | C9891 | |
| Chicken serum | Sigma | C5405 | |
| Screen cups | Sigma | CD1-1KT | |
| Syringe filters | Fisher Scientific | 09-754-25 | |
| 100 micron nylon mesh | Small Parts, INC | CMN-100-D | |
| 30 micron mesh | Small Parts, INC | CMN-30-D | |
| 15 micron mesh | Dynamic Aqua-Supply Ltd. | NTX15 | |
| Laminin | Sigma | L2020 | |
| Collagen-1 | Collagen Biomed | PC0701 | |
| Fibronectin | Sigma | F1141 | |
| Vitronectin | Sigma | V-0132 | |
| Elastin | Sigma | E-6402 | |
| Bioflex plate | Flexcell International | BF-3001U | Uncoated |
| Flexcell Strain Unit | Flexcell International | FX-5000 |
Referências
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