Um sistema experimental para estudar Mecanotransdução em células do pulmão fetal
Summary
Forças mecânicas desempenham um papel chave no desenvolvimento de pulmão e lesão pulmonar. Aqui, nós descrevemos um método para isolar roedores fetais de pulmão de células do tipo II epiteliais e fibroblastos e expô-los a estimulação mecânica utilizando um<em> In vitro</em> Sistema.
Abstract
Forças mecânicas geradas in utero pelos repetitivos movimentos como de respiração e pela distensão líquido são essenciais para o desenvolvimento do pulmão normal. Um componente-chave do desenvolvimento do pulmão é a diferenciação de células alveolares do tipo II epiteliais, a principal fonte de surfactante pulmonar. Estas células também participar na homeostase de fluido no lúmen alveolar, de defesa do hospedeiro, e reparação de lesão. Além disso, as células do pulmão distais do parênquima pode ser directamente exposta ao estiramento exagerada durante a ventilação mecânica após o nascimento. No entanto, os mecanismos precisos moleculares e celulares, através da qual as células do pulmão detectam estímulos mecânicos para influenciar o desenvolvimento do pulmão e para promover a lesão pulmonar não são completamente compreendidos. Aqui, nós proporcionar um método simples e de alta pureza para isolar células de tipo II e de fibroblastos a partir de pulmões de roedores fetais. Em seguida, nós descrevemos um sistema de vitro, A Unidade de Strain Flexcell, para proporcionar a estimulação mecânica para células fetais, simulando forças mecânicas emdesenvolvimento pulmonar fetal ou lesão pulmonar. Este sistema experimental fornece uma excelente ferramenta para investigar os mecanismos moleculares e celulares em células de pulmão de feto expostos a esticar. Usando essa abordagem, nosso laboratório identificou vários receptores e proteínas sinalizadoras que participam mecanotransdução no desenvolvimento do pulmão fetal e lesão pulmonar.
Protocol
Discussion
Neste artigo, nós descrevemos um método para isolar as células fetais do tipo II epiteliais e fibroblastos e expô-los a estimulação mecânica usando o aparelho Strain Flexcell. Usámos esta técnica para avaliar a diferenciação de células epiteliais 1,2 e para estudar receptor e vias de sinalização activados por estiramento 3-9. Além disso, este método também pode ser usado para investigar as respostas das células induzidas por lesão mecânica 10,11. O procedimento baseia…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Apoiado pelo NIH concessão HD052670.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| DMEM | Sigma | D5648 | |
| HEPES | Sigma | H3375 | |
| Collagenase 1 | Sigma | C0130 | |
| Collagenase 1A | Sigma | C9891 | |
| Chicken serum | Sigma | C5405 | |
| Screen cups | Sigma | CD1-1KT | |
| Syringe filters | Fisher Scientific | 09-754-25 | |
| 100 micron nylon mesh | Small Parts, INC | CMN-100-D | |
| 30 micron mesh | Small Parts, INC | CMN-30-D | |
| 15 micron mesh | Dynamic Aqua-Supply Ltd. | NTX15 | |
| Laminin | Sigma | L2020 | |
| Collagen-1 | Collagen Biomed | PC0701 | |
| Fibronectin | Sigma | F1141 | |
| Vitronectin | Sigma | V-0132 | |
| Elastin | Sigma | E-6402 | |
| Bioflex plate | Flexcell International | BF-3001U | Uncoated |
| Flexcell Strain Unit | Flexcell International | FX-5000 |
Referências
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