마우스 폐에 돌기 세포의 분리
Summary
마우스 폐 돌기 세포의 고도 정화 준비가 설명되어 있습니다. 구체적인 중점이 종래의 돌기 세포 집합의 고립에 제공됩니다.
Abstract
폐암 돌기 세포 (DC)는 호흡기 tolerogenic 응답의 제어뿐만 아니라 3 침입 병원균 1,2를 감지의 근본적인 역할을한다. 폐암 돌기 세포 중 적어도 세 가지 주요 하위 집합은 생쥐에서 설명되었습니다 : 종래의 DC (CDC) 4, plasmacytoid DC (PDC) 5 IFN 생산 킬러 DC (IKDC) 6,7. CDC 집합은 폐 8 가장 유명한 DC의 하위 집합입니다.
DC의 하위 집합을 식별하는 것으로 알려진 일반적인 마커는 CD11c, 유형 I 또한, monocytes, macrophages, neutrophils 및 일부 B 세포 9 표현 transmembrane 인테 그린 (β2)입니다. 일부 조직에서는, 마우스 DC를 식별하는 마커로 CD11c를 사용하면 대부분의 CD11c + 세포가 주요 histocompatibility 복잡한 클래스 II (MHC – II)의 높은 수준을 표현 CDC의 하위 집합을 나타냅니다 비장에 같은 유효합니다. 그러나, 폐는 더 이질적인 조직입니다사이드 DC의 하위 집합은 MHC – II의 낮은 수준의 한판 승부 CD11c 높은 수준을 표현 뚜렷한 세포 인구의 높은 비율 있습니다. 의 특성과 대부분 F4/80, 지라 대식 세포 표지 자사의 표현에 따르면, CD11c 하이 MHC – II 그런 건 폐 전지 인구가 잠재적인 DC 전구체 11로, 폐동맥 macrophages 최근 10으로 확인되었습니다.
마우스 PDC 대조적으로, 폐의 면역 반응에 CDC의 특정 역할의 연구는 이러한 세포의 격리에 도움이 될 특정 마커의 부족으로 인해 제한되었습니다. 따라서,이 작품에서 우리는 고도로 정제된 마우스 폐 질병을 분리하는 절차를 설명합니다. 폐 DC의 하위 집합의 분리는 호흡기 병원균뿐만 아니라 폐의 호스트 면역 반응을 일으킬 수있다 환경 요인에 대한 응답에서 이러한 세포의 기능에 대한 통찰력을 얻기 위해 매우 유용한 도구를 나타냅니다.
Protocol
Discussion
폐 마우스 DC의 격리가 호흡기 자극의 다양한 연구를위한 중요한 기술이다. 이러한 세포를 얻는 과정은 세포의 손실뿐만 아니라 세포 생존과 정결을 방지 중요한 단계를 포함하고 있습니다. 수령 전에 폐가 Perfusing 것은 물론 오염 물질을 감소 적혈구와 같은 주변 세포를 제거하는 데 도움이 될 것입니다. 폐 다수의 처리 때 자동 분리의 사용 advanteogus 수있다 그렇지 않으면 수동으로 완료되면 collag…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자 microphotographs 그의 도움을 셀 정렬과 피터 Mottram 함께 그녀의 도움 LSU의 유동세포계측법 코어 시설에서 마릴린 디트리히에 감사드립니다. 이 작품은 비행 수행자 의학 연구소, LSU 경쟁력 연구 프로그램 수상, 그리고 NIH / NIAID 기금 P20 RR020159 및 R03AI081171에 의해 후원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| ACK lysing buffer | Invitrogen | D6-0005DG | |
| Anti-mouse CD11c (HL3) | BD Pharmingen | 5580979 | PE-Cy7 conjugated |
| Anti-mouse I-A/I-E (269) | BD-Pharmingen | 553623 | FITC conjugated |
| Collangenase Type 1A | Sigma | 9891-500MG | |
| Cell strainers | BD Falcon | 352340, 352360 | |
| CD11c (N418) Microbeads | Miltenyi | 130-052-001 | |
| DNase I | Sigma | D5025-150KU | |
| Hank’s Balanced Salt solution | Invitrogen | 14170 | |
| Hepes buffer solution | Invitrogen | 15630 | |
| Petri dishes 60 mm | BD Falcon | 351016 | |
| GentleMACS™ C tubes | Miltenyi | 130-093-237 | |
| Gentle MACS dissociator | Miltentyi | 130-093-235 | |
| AutoMACS-Pro™ | Miltenyi | 130-092-545 | |
| FASCS Aria | BD |
Referências
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