सामान्य और असामान्य मानव Hematopoiesis के पूर्व vivo अनुकरण
Summary
Hematopoiesis के लिए एक 3 डी संस्कृति प्रणाली मानव गर्भनाल रक्त और leukemic अस्थि मज्जा की कोशिकाओं का उपयोग वर्णित है. विधि बाह्य मैट्रिक्स प्रोटीन के साथ लेपित एक झरझरा सिंथेटिक polyurethane पाड़ का उपयोग पर आधारित है. इस पाड़ कोशिकाओं की एक विस्तृत श्रृंखला को समायोजित करने के लिए अनुकूलनीय है.
Abstract
Hematopoietic स्टेम कोशिकाओं को एक अद्वितीय microenvironment की आवश्यकता है क्रम में रक्त कोशिका 1 गठन को बनाए रखने, अस्थि मज्जा (बी एम) एक जटिल तीन आयामी (3 डी) ऊतक जिसमें hematopoiesis है niches के है स्थानिक सेलुलर microenvironments संगठित द्वारा विनियमित 2-4 करार दिया. बी.एम. niches के संगठन समारोह या सामान्य या घातक 5 बी.एम. की शिथिलता के लिए महत्वपूर्ण है. इसलिए vivo में एक पूर्व vivo अनुकरण का उपयोग microenvironment में की एक बेहतर समझ में मदद मिलेगी हमें 6 leukemogenesis की आणविक, सेलुलर और microenvironmental निर्धारकों स्पष्ट है.
वर्तमान में, hematopoietic कोशिकाओं इन विट्रो में दो आयामी (2 डी) टिशू कल्चर बोतल / 7 अच्छी तरह प्लेटें या तो allogenic या xenogenic stromal कोशिकाओं के साथ सह – संस्कृति या बहिर्जात 8 साइटोकिन्स के अलावा की आवश्यकता में संवर्धित कर रहे हैं. इन शर्तों कृत्रिम और vivo में से अलग </e> microenvironment में है कि वे 3 डी सेलुलर niches की कमी है और असामान्य रूप से उच्च साइटोकाइन सांद्रता जो और 9,10 pluripotency के भेदभाव नुकसान में परिणाम कर सकते हैं करने के लिए कोशिकाओं को उजागर कर रहा हूँ.
इस के साथ साथ, हम एक उपन्यास 3D अस्थि मज्जा संस्कृति प्रणाली है कि vivo में 3 डी विकास पर्यावरण में simulates और बहिर्जात वृद्धि कारकों का अभाव में multilineage hematopoiesis का समर्थन करता है प्रस्तुत करते हैं. अत्यंत झरझरा पाड़ इस polyurethane (पु) से बना प्रणाली में इस्तेमाल किया, उच्च घनत्व एक उच्च विशिष्ट सतह क्षेत्र भर में 11 2d में पारंपरिक monolayer की संस्कृति की तुलना में सेल के विकास की सुविधा. हमारा काम संकेत दिया है कि यह मॉडल मानव कॉर्ड (सीबी) रक्त mononuclear कोशिकाओं (एमएनसी) 12 और बहिर्जात साइटोकिन्स के अभाव में प्राथमिक leukemic कोशिकाओं के विकास का समर्थन किया है. इस उपन्यास 3 डी अनुकरण hematopoiesis अध्ययन और लेकिमिया के लिए उपन्यास उपचार का पता लगाने के लिए एक मानव प्रयोगात्मक मॉडल के विकास के लिए एक व्यवहार्य मंच प्रदान करता है.
Protocol
Discussion
पूर्व vivo 3D संस्कृति यहाँ प्रस्तुत प्रणाली हमें hematopoiesis के एक 3 डी biomimicry स्थापित करने के लिए सक्षम बनाता है कि का स्मरण दिलाता है मूल बी.एम. वास्तुकला और सेलुलर बहिर्जात साइटोकिन्स की स्वतंत्र फेनोटाइप. 3D म…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम रिचर्ड थॉमस Leukaemia फंड, लेडी टाटा मेमोरियल ट्रस्ट, Northwick पार्क अस्पताल Leukaemia रिसर्च ट्रस्ट फंड और राष्ट्रीय स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान (NIHR), ब्रिटेन द्वारा वित्त पोषित किया गया.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue No |
| Dioxan | Invitrogen | D20,186-3 |
| PBS | Gibco | 14190-094 |
| IMDM | Invitrogen | 12440-053 |
| Ficoll-Paque | GE Healthcare | 17-1440-02 |
| Penicillin/Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 |
| MTS | Promega | G3580 |
| Glutaraldehyde | Fluka Biochemika | 49624 |
| Wright-Giemsa | Sigma-Aldrich | WG32 |
| Fetal bovine serum | Gibco | 10108-165 |
| CD71 | Santa Cruz Biotechnology | sc-32272 |
| Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11001 |
| CD45-FITC | BD Pharmigen | 74895 |
| CD71-PE | BD Pharmigen | 555537 |
| CD235a-PE-Cy5 | BD Pharmigen | 555570 |
| Sodium azide | Sigma-Aldrich | S-8032 |
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