Измерение давления в левом желудочке в позднем эмбриональных и новорожденных мышей
Summary
Измерение давления в левом желудочке (ЛЖ) в эмбриональных и новорожденных мышей описано. Давление измеряется путем введения иглы подключены к заполненной жидкостью датчика в LV под ультразвуковым контролем. Необходимо соблюдать осторожность, чтобы поддерживать нормальную функцию сердца в протоколе исследования.
Abstract
Артериальное давление значительно возрастает во время эмбрионального и постнатального развития у позвоночных животных. У мышей, кровоток первая обнаруживаются вокруг эмбриональных день (E) 8.5 1. Систолическое левого желудочка (ЛЖ) давление на 2 мм рт.ст. E9.5 и 11 мм рт.ст. в E14.5 2. На этих середине эмбриональной стадии, LV отчетливо видна через стенку грудной клетки для инвазивного измерения давления, так как ребра и кожи, не полностью разработана. Между E14.5 и родов (примерно E21) изображения методы должны быть использованы для просмотра LV. После родов, среднее артериальное давление повышается от 30 – 70 мм рт.ст. от послеродовой день (P) 2 – 35 3. Помимо P20, артериальное давление может быть измерено с твердотельными катетерами (т.е. Миллар или Scisense). Прежде, чем P20, эти катетеры являются слишком большими для развивающихся мыши артерий и артериальное давление должно быть измерено с помощью пользовательских вытащил пластиковый катетер прилагается к заполненной жидкостью датчики давления 3 или стеклянной микропипетки ATTболели в серво нулевой датчики давления 4.
Наши последние исследования показали, что наибольшее повышение артериального давления происходит в конце эмбрионального в раннем послеродовом периоде у мышей 5-7. Это большое повышение артериального давления может влиять на клетки гладкой мускулатуры (SMC) фенотип в развивающихся артерии и вызвать важные события механотрансдукции. У человека болезнь, при которой механические свойства развивающихся артерий скомпрометированы дефектов белки внеклеточного матрикса (синдром т.е. Марфана 8 и Supravalvular аортальный стеноз 9) быстрые изменения артериального давления в течение этого периода могут способствовать фенотип заболевания и тяжести через изменения в механотрансдукции сигналов. Таким образом, важно иметь возможность оценить изменения артериального давления во время конца эмбрионального и неонатального периода на мышах болезни человека.
Мы опишем метод для измерения давления LV в концеэмбриональные (E18) и раннем послеродовом (P1 – 20) мышей. Игла прикрепляется к заполненной жидкостью датчик давления вставляется в LV под ультразвуковым контролем. Принимаются меры для поддержания нормальной сердечной деятельности во время экспериментального протокола, особенно для эмбриональных мышей. Представитель данные представлены и ограничения протокола обсуждается.
Protocol
Discussion
Протокол, представленные здесь предоставляет метод для измерения давления LV в конце эмбрионального и раннего неонатального мышей. Основным ограничением этого протокола является временным разрешением давления в системе. Давление сигнал затухает по мере продвижения от LV через иглу к ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа финансировалась, в частности, путем грантов NIH HL087653 и HL105314. Некоторые из этих методов были разработаны в лаборатории д-ра Роберта Mecham в Вашингтонском университете в Школе медицины.
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| High resolution ultrasound system | Visualsonics | Vevo 770 | Or other appropriate ultrasound system |
| High frequency ultrasound probes | Visualsonics | 708 and 707B | |
| Imaging platform and injection arm | Visualsonics | Imaging Station 2 | With ECG and temperature feedback control of platform |
| Pressure transducer | AD Instruments | MLT 844 | |
| Bridge amplifier | AD Instruments | ML221 | |
| Data acquisition system | AD Instruments | ML866 | |
| Data recording software | AD Instruments | LabChart | |
| Ring stand and clamp | Various suppliers | To hold pressure transducer during measurements | |
| 3-way stopcocks with luer connections, male lock | Cole Parmer | 30600-02 | |
| 1/16″ ID Tygon Tubing | Cole Parmer | 06408 | |
| Male and female luers w/ 1/16″ hose barb | Cole Parmer | 45510-50 45510-00 | |
| 24″ tubing with male and female luer at each end | Cole Parmer | 30600-60 | |
| 3 and 10 mL syringes | BD Biosciences | ||
| 30 and 25G needles | BD Biosciences | 1.5 inches in length | |
| Big Ben manometer | Riester | 1456-100 | |
| Saline | Various suppliers | ||
| Heparin | Various suppliers | ||
| Ultrasound gel | Parker | Aquasonic 100 | |
| Hair remover lotion | Nair |
Referências
- Ji, R. P. Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper. Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).
- Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S. Developmental changes in ventricular diastolic function correlate with changes in ventricular myoarchitecture in normal mouse embryos. Circ. Res. 93 (9), 857-865 (2003).
- Huang, Y., Guo, X., Kassab, G. S. Axial nonuniformity of geometric and mechanical properties of mouse aorta is increased during postnatal growth. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 290 (2), H657-H664 (2006).
- Ishii, T., Kuwaki, T., Masuda, Y., Fukuda, Y. Postnatal development of blood pressure and baroreflex in mice. Auton. Neurosci. 94 (1-2), 34-41 (2001).
- Le, V. P., Knutsen, R. H., Mecham, R. P., Wagenseil, J. E. Decreased aortic diameter and compliance precedes blood pressure increases in postnatal development of elastin-insufficient mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. , (2011).
- Wagenseil, J. E. Reduced vessel elasticity alters cardiovascular structure and function in newborn mice. Circ. Res. 104 (10), 1217-1224 (2009).
- Wagenseil, J. E. The importance of elastin to aortic development in mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299 (2), H257-H264 (2010).
- Ramirez, F., Sakai, L. Y., Rifkin, D. B., Dietz, H. C. Extracellular microfibrils in development and disease. Cell. Mol. Life Sci. 64 (18), 2437-2446 (2007).
- Li, D. Y. Elastin point mutations cause an obstructive vascular disease, supravalvular aortic stenosis. Hum. Mol. Genet. 6 (7), 1021-1028 (1997).
- Roth, D. M., Swaney, J. S., Dalton, N. D., Gilpin, E. A., Ross, J. Impact of anesthesia on cardiac function during echocardiography in mice. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (6), H2134-H2140 (2002).
- Phoon, C. K. Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development. Pediatr. Res. 60 (1), 14-21 (2006).
