Caracterização fenotípica e funcional das células endoteliais Formadoras de Colônias derivado do sangue do cordão umbilical humano
Summary
Células endoteliais que formam colônias (ECFCs) estão circulando células endoteliais com potencial clonal proliferativa robusto que exibe intrínseco<em> In vivo</emNavio> capacidade de formação. Caracterização fenotípica e funcional das células endoteliais excrescência derivados de CB são importantes para identificar e isolar<em> Bona fide</em> ECFCs potencial para aplicação clínica na reparação de tecidos danificados.
Abstract
Vistas de longa data de formação de novos vasos sanguíneos através de angiogênese, vasculogênese e arteriogênese foram avaliados recentemente 1. A presença de circulação de células progenitoras endoteliais (EPCs) foram primeiramente identificadas no sangue periférico humano adulto por Asahara et al. Em 1997 2 trazendo uma infusão de novas hipóteses e estratégias para a regeneração e reparação vascular. EPCs são raras, mas os componentes normais do sangue circulante de que o lar de locais de formação dos vasos sanguíneos ou remodelação vascular, e facilitar quer vasculogênese pós-natal, a angiogênese, ou arteriogênese em grande parte através da estimulação parácrina de parede do vaso existente derivadas de células 3. Nenhum marcador específico para identificar um EPC foi identificado, e no presente estado do campo é entender que tipos de células-tronco hematopoiéticas, incluindo numerosos proangiogenic e células progenitoras, células circulantes angiogênicas, TIE2 + de monócitos, cel progenitor mielóidels, tumorais macrófagos associados, e M2 macrófagos activados participar em estimular o processo angiogénico em uma variedade de sistemas de modelos animais e pré-clínicos em seres humanos em numerosos estados de doença 4, 5. Células endoteliais que formam colônias (ECFCs) são raras circulantes células endoteliais viáveis caracterizadas por potencial robusto clonal proliferativa, colônia secundária e terciária capacidade de formação sobre repique, e capacidade de formar intrínseca em vasos in vivo sobre o transplante em ratos imunodeficientes 6-8. Enquanto ECFCs foram isoladas com sucesso a partir do sangue periférico de indivíduos adultos saudáveis, o sangue do cordão umbilical (CB) de recém-nascidos saudáveis e parede do reservatório de numerosos humanos vasos arteriais e venosos 6-9, CB possui a maior freqüência de ECFCs 7 que exibição o mais robusto potencial clonal proliferativa e forma os vasos sanguíneos duráveis e funcionais in vivo 8, 10-13. Enquanto a derivação deECFC a partir de sangue periférico adulto tem sido apresentada 14, 15, aqui descrever as metodologias para a derivação, a clonagem, a expansão, e in vitro em bem como em caracterização in vivo das ECFCs do umbilical humano CB.
Protocol
Discussion
Caracterização fenotípica e funcional dos putativos células progenitoras endoteliais é importante para identificar os ECFCs autênticas que são capazes de clonalmente e serialmente re-plaqueamento em cultura e dar origem a duráveis e funcional vasos sanguíneos implantáveis in vivo. O sangue do cordão umbilical humano é enriquecido com ECFCs ea concentração desses declínios células circulantes com o envelhecimento ou a doença de 10. Estudos recentes sugerem que ECF…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dr. Yoder é consultor de Tecnologias EndGenitor, Inc. e membro do conselho de Rimedion Technologies, Inc.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Heparin Sodium Injection, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 |
| Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 |
| Mixing cannula | Maersk Medical | 500.11.012 |
| EGM-2 | Lonza | CC-3162 |
| Defined FBS | Hyclone | SH30070.03 |
| TrypLE express | Gibco | 12605 |
| Rat type I collagen | BD Biosciences | 354236 |
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 |
| FcR Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 |
| hCD31, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555445 |
| hCD45, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555482 |
| hCD14, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555397 |
| hCD144, PE conjugated | eBioscience | 12-1449-80 |
| hCD146, PE conjugated | BD Pharmingen | 550315 |
| hCD105, PE conjugated | Invitrogen | MHCD10504 |
| Ms IgG1,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555748 |
| Ms IgG1,k antibody, PE conjugated | BD Pharmingen | 559320 |
| Ms IgG2a,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555573 |
| Anti-human CD31 | Dako | clone JC70/A |
| Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 |
| 0.22-μm vacuum filtration system | Millipore | SCGPU05RE |
| Glacial acetic acid, 17.4N | Fisher | A38-500 |
| Antibiotic-Antimycotic | Invitrogen | 15240-062 |
| Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 |
| IHC Zinc Fixative | BD Biosciences | 550523 |
| Sytox green reagent | Invitrogen | S33025 |
| Cloning cylinders, sterile | Fisher Scientific | 07-907-10 |
Referências
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