쥐 간장 세포의 분리 및 차 문화
Summary
기본 hepatocytes는 생리학 관련 실험 시스템의 생화학, 분자, 그리고 신진 대사 기능을 평가하는 유용한 도구를 제공합니다. 우리는 지속적으로 to1.0 × 10 백업 실행 가능한 hepatocytes를 생성 원위치 간 재관류에 쥐에 대한 신뢰할 수있는 프로토콜을 설명<sup> 8</sup88 ~ 96% 사이의 세포 생존 능력과 준비를 당> 세포.
Abstract
기본 hepatocyte 문화는 광범위 간기능, 질병, pathophysiology, 약리학 및 기타 관련 과목의 기초 연구에 사용되고 유용한 도구입니다. 그대로 hepatocytes의 절연을위한 2 단계 collagenase 재관류를 기반 방법은 먼저 1,969 1 베리와 친구에 의해 소개되었으며, 그 이후 많은 수정 작업을 거쳐왔다. 가장 일반적으로 사용되는 기술은 Seglenin 1,976 2로 설명되었다. 기본적으로 hepatocytes는 포털 정맥을 통해 비 순환 collagenase 재관류에 의한 anesthetized 성인 쥐에서 dissociated 있습니다. 분리된 세포 후 100 μm의 기공 크기의 메쉬 나일론 필터를 통해 여과하고, 접시에 배양해 있습니다. 4 시간 배양 후, 매체는 문화에 대한 추가적인 시간 동안 혈청 함유 또는 혈청 프리 매체, 예를 들어 HepatoZYME-SFM,로 대체됩니다. 이러한 절차는 더 나은 텍스트로보다 영상에 의해 입증하실 수 있습니다 외과 및 무균 배양 단계를 필요로합니다. H오히려, 우리는 다수의 유력한 hepatocytes의 생성에 항상 있도록 비디오 및 서면 프로토콜 모두에서 이러한 절차에 대한 자세한 단계를 문서화.
Protocol
Discussion
hepatocytes의 차 문화가 널리 간 생리와 병리의 다양한 측면을 연구하는 데 사용되는 체외 모델입니다. 예를 들어, 주 문화는 P450 cytochromes, 약물 대사, 약물 – 약물 상호 작용 및 세포 독성 및 genotoxicity 3-7의 메카니즘을 포함한 마약 metabolizing 효소의 표현과 기능을 평가하는 데 사용됩니다. 쥐의 간장 세포의 격리와 문화를 설명하는 프로토콜은 8. Aiken 외의 이전 보고서?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 기술 지원을위한 조시 Basford 박사 샤오 분 리튬 감사드립니다. 이 작품은 NIH 보조금 (DK70992와 ML에 DK92779)에 의해 부분적으로 지원되었다.
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