Sammlung Protokoll zur menschlichen Pankreas
Summary
Dieses Video zeigt eine Dissektion Verfahren zur Bearbeitung der menschlichen Bauchspeicheldrüse in mehrere Speicherformate. Anatomische Orientierung wird im Laufe der Bauchspeicheldrüse Regionen aufrechterhalten, um Definition von Regional-Inselchen Zusammensetzung und Dichte zu ermöglichen.
Abstract
Diese Zergliederung und Probenahmeverfahren wurde für das Netzwerk für Pankreas-Organ Donors mit Diabetes (nPOD) Programm zur Vorbereitung der Bauchspeicheldrüse von Organspendern gewonnen Leichen zu standardisieren entwickelt. Die Bauchspeicheldrüse ist in 3 Regionen (Kopf, Körper, Schwanz) von seriellen Querschnitten der ganzen medial nach lateral Achse gefolgt aufgeteilt. Abwechselnd Abschnitte sind für Paraffin und frisch gefrorenen Blöcken und Überrest Proben verwendet werden, für Snap gefrorene Probe Präparate zerkleinert, entweder mit oder ohne RNAse-Inhibitoren für DNA, RNA oder Protein isoliert. Das übergeordnete Ziel der Bauchspeicheldrüse Dissektion Verfahrens ist es, die gesamte Bauchspeicheldrüse zu probieren und gleichzeitig anatomische Orientierung.
Endokrine Zelle Heterogenität in Bezug auf die Inselzellen Zusammensetzung, Größe und Zahlen ist für den menschlichen Inseln im Vergleich zum Nagetier Inselchen 1 angegeben. Die Mehrheit der menschlichen Inselzellen aus der Bauchspeicheldrüse Kopf, Körper und Schwanz Regionen der Insulin-containin komponiertg β-Zellen durch geringere Anteile an gefolgt Glukagon-haltige α-Zellen und Somatostatin-haltigen δ-Zellen. Pankreaspolypeptid PP-haltige Zellen und Ghrelin-haltigen Epsilon Zellen sind auch vorhanden, aber in geringer Anzahl. Im Gegensatz dazu enthält das uncinatus Region Inseln, die vor allem von Pankreas-Polypeptid enthaltende PP-Zellen 2 zusammengesetzt sind. Diese regionalen Unterschiede ergeben sich aus Inselchen entwicklungsbedingte Unterschiede. Die Bauchspeicheldrüse entwickelt sich aus den ventralen und dorsalen Pankreas Knospen im Vorderdarm und nach der Drehung des Magens und des Duodenums, die Bauchlappen bewegt und verschmilzt mit der dorsalen 3. Die Bauchlappen bildet den hinteren Teil des Kopfes einschließlich der hakenförmigen durch, während der dorsalen Lappen führt zu dem Rest des Organs. Regionale Pankreas Variation ist auch mit der Heckbereich mit einer höheren Dichte Inselchen im Vergleich zu anderen Regionen und die dorsalen Lappen-abgeleiteten Komponenten durchlaufen selektive Atrophie bei Typ 1-Diabetes berichtet <sbis> 4,5.
Zusätzliche Organe und Gewebe werden oft von den Organspendern gewonnen und zählen Lymphknoten, Milz und nicht-Lymphknoten an. Diese Proben werden mit ähnlichen Formaten wie der Bauchspeicheldrüse unter Zusatz von Isolierung von kryokonservierten Zellen gewonnen. Wenn der proximalen Duodenum mit der Bauchspeicheldrüse ist im Preis inbegriffen, kann Duodenalschleimhaut für Paraffin und gefrorenen Blöcken und Hackfleisch Snap gefrorener Zubereitungen gesammelt werden.
Protocol
Discussion
Das Ziel dieses Verfahrens ist es, einen Standard, der Bauchspeicheldrüse Verarbeitung harmonisiert werden auf mehreren Sammelstellen können definieren und ermöglichen so einen Vergleich der Ergebnisse von verschiedenen Gruppen erhalten. Die Dissektion Methode basiert auf Standard-chirurgischen Pathologie Praxen mit zusätzlichen Schritten zur Annotation von großen Regionen der Bauchspeicheldrüse durch intra-regionalen Unterteilungen gefolgt basiert. Die Standardisierung der Bioprobe Verarbeitungsmethoden ist erfor…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren danken den Spendern die Familien und die Orgel Beschaffung Organisationen in diesem Forschungs-und Maria Martino und Irina Kusmartseva für ihre fachkundige Unterstützung beteiligt. Diese Arbeit wurde von der Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA) zur Unterstützung des Network for Organ Donors mit Pankreas-Diabetes gefördert.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Dissection instruments including scalpels with 22 blades | Various | Various | |
| Centrifuge tubes (15 and 50 ml) | Fisher Scientific | 05-539-5, 430828 | Sterile |
| Cryotubes(1.8 ml) | VWR North America | 89004-300 | Sterile, bar codes optional |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Surgical Pathology Ink | |||
| Cassettes | Mercedes Medical | CAS ECO109 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher Scientific | 23-245-685 | |
| OCT Freezing Media | TissueTek | 4583 | |
| Molds | ThermoScientific | 58952 | Various sizes |
| Isopentane | Fisher Scientific | O3551-4 | OCT chilling bath |
| Dry ice | OCT chilling bath | ||
| Liquid nitrogen in Dewar flask | Snap freezing cryovials | ||
| Cell culture dish (100mm) | Corning | 430167 | Sterile |
| Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | Sterile, store refrigerated, glutamine included |
| Fetal Bovine Serum | Cellgro | 35-010-CV | Sterile, store frozen aliquots |
| Penicillin/Streptomycin/Antifungal | GIBCO | 15240-062 | Sterile, store frozen aliquots |
| Type 9 Paraffin | Richard-Allan Scientific | 8337 | |
| 1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | Sterile |
| 16% Paraformaldehyde | EM Sciences | 15710 | Make fresh, store refrigerated |
| 8% Glutaraldehyde | EM Sciences | 16019 | Make fresh, store refrigerated |
| Biosafety Level 2 hood | Various | ||
| Ultra-low freezer | Various | ||
| Sakura Cassette Printer | Sakura | ||
| Sakura VIP300 | Sakura | Automatic paraffin processor | |
| Paraffin Embedding Station | ThermoFisher |
Table 1. Specific reagents and equipment.
Referências
- Brissova, M. Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy. J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).
- Rahier, J. The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes. J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).
- Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development. J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).
- Wittingen, J., Frey, C. F. Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas. Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).
- Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. Cellular composition of the human diabetic pancreas. Diabetologia. 24, 366-371 (1983).
- Vaught, J. An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources. J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).
- Gianani, R. Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies. J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).
- Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hyöty, H. Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of β-cell autoimmunity. Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).
- In’t Veld, P. Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors. Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).
- Töns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans. Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).
