השתלת איי הלבלב לקופסית הכליה בעכברים סוכרתיים של
Summary
פרוטוקול שלנו פותחה כדי נקייה בקלות לספק איים או תאים תחת הקפסולה הכליה של עכברים. תאים מרוכזים לתוך כדורי בצינור הסופי משמש השתלת התאים תחת הקפסולה כליות. הקלות של טכניקה זו מפחיתה את הלחץ על התאים ואת העכבר.
Abstract
פרוטוקול שלנו פותחה כדי נקייה בקלות לספק איים או תאים תחת הקפסולה של הכליה בעכברים סוכרתיים או רגיל. מצאנו כי זה היה קל יותר לרכז את איים או תאים לתוך כדורי בצינור האספקה הסופי (PE50) המשמש השתלת התאים תחת הקפסולה כליות. טכניקה זו מספקת הן מהירות וקלות תוך צמצום כל לחץ חזק על התאים או העכבר.
טוען: התיישבו, הרים יד, איים או תאים pelleted הם aspirated בזהירות את החלק התחתון של צינור microcentrifuge 1.5 מ"ל באמצעות pipetteman p200 ו ישר, קיר דק קצה פיפטה. אורכו של צינור PE50 מחוברת בקצה פיפטה בעזרת צינור קטן מתאם סיליקון. תאים מותר להתיישב, בקצה, ולאחר מכן מועברים על ידי צינורות PE50 לאט חיוג pipetteman. לאחר התאים לקראת סוף צינורות PE50, שריטה נעשית ואת צינורות מתאם סיליקון מושם על שריטה. צינורות PE50 מועבר 15 מ"ל חרוטי המכיל pipet 5 מ"ל לחתוך, ואת צינורות PE50 הוא מודבק על הצד של pipet 5 מ"ל כדי למנוע מסתלסל במהלך centrifuging. תאים מותר להגיע 1,000 סל"ד ועצר.
השתלה: עכברים מקבל מורדמים, מגולח, וניקה. חתך קטן עשה על האגף השמאלי של העכבר את הכליה חשוף. , כליה שומן, רקמת נשמרים עם ספוגית לחה מלח רגיל. סוף דיסטלי של PE50 מצורף מזרק כונן בורג המילטון, המכיל קצה פיפטה, באמצעות צינורות מתאם סיליקון. ניק קטן עשוי בצד האגף הימני של הכליה, לא גדול מדי ולא עמוק מדי. הסוף של צינורות משופעים PE50, הקרוב התאים, ממוקמת היטב תחת הקפסולה, צינורות הוא נע סביב בעדינות כדי לפנות מקום בעוד בשטיפת מלוחים נורמלי; כמוסת יבש יכול לקרוע בקלות. בועות אוויר קטנות מועבר תחת הקפסולה על ידי חיוג לאט את הכונן בורג מזרק. איי הם אז נמסר לאט מאחורי בועת אוויר. הומאוסטזיס כליה לאחר איים הועברו נשמרת קישוטים הוא צרוב עם חום נמוך. הכליה ממוקמת בחזרה לחלל הצפק ואת העור הם sutured בסיכות. עכברים מטופלים מיד עם Flunixin ואת עצירות מ"ר והניח בתוך כלוב על כרית חימום.
Protocol
Discussion
פרוטוקול זה מספק אפשרות מעשית ויעילה עבור נקייה בקלות ומספק איים או תאים תחת הקפסולה של הכליה בעכברים סוכרתיים או רגיל. הטכניקה של ריכוז pelleting איים או תאים לתוך צינורות האספקה הסופי (PE50) המשמש השתלת התאים תחת הקפסולה כליות מציעה שיטה קלה ויעילה של השתלת תאים תוך צמצום כל לחץ ח…
Acknowledgements
מרכז קליפורניה בסן פרנסיסקו סוכרת. NIH קליפורניה בסן פרנסיסקו DERC Core איילט. JDRF. LIfeScan חברת ג'ונסון אנד ג'ונסון החברה.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Surgical gloves | Fisher | 11-394-95(sz) | ||
| Surgical scrub sponges | Moore medical | 42940AK | ||
| Forceps | Miltex | 6-114 and 6-26 | 2 with teeth, 2 straight | |
| Dissecting scissors n=2 | Miltex | 5-290 | ||
| Oster razor (sz. 40 blade) | Fisher | 01-305-10B | ||
| 4×4 Sterile gauze pads | Moore Medical | 08252AK | ||
| Povidone Iodine pads | Moore Medical | 08486AK | ||
| Alcohol pads | Fisher | 14-819-2 | ||
| Heating pad | Moore Medical | 42508AK | ||
| 23G or 25G needles | 1″ long | |||
| Cidex solution | Moore Medical | 07535AK | for cleaning/santizing instruments | |
| PE50 polyethylene tubing | BD | 427411 | PE50, 0.965mm O.D. x 0.58mm I.D. | |
| Cidex + 28 day soln | Moore | 35625AK | ||
| Silicone tubing | Spectrum Chromat. | 123732 | 5/32”OD x 1/32” ID | |
| Instrument sterilizing container | Moore Medical | 39074AK | ||
| Straight Pipet Tips | TipOne | 1111-0810 | sterile | |
| Glass syringe w/screw-drive | Hamilton | 1001 | ||
| Cauterizing tool | Roboz | RS230 | ||
| Needle Holder | Moore Medical | 41-067 | ||
| 5-0 silk | Look | 754B | for suture (6-C) | |
| Cotton tipped swab | Moore Medical | |||
| 9mm autoclip stapler | BD | 7630 | ||
| 9mm staples | BD | 7631 | ||
| 9mm staple remover | BD | 7637 |
Referências
- Tang, Q., Henriksen, K. J., Bi, M., Finger, E. B., Szot, G., Ye, J., Masteller, E. L., McDevitt, H., Bonyhadi, M., Bluestone, J. A. In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes. J Exp Med. 199, 1455-1465 (2004).
- Rulifson, I. C., Szot, G. L., Palmer, E., Bluestone, J. A. Inability to induce tolerance through direct antigen presentation. Am J Transplant. 2, 510-519 (2002).
- Lenschow, D. J., Zeng, Y., Hathcock, K. S., Zuckerman, L. A., Freeman, G., Thistlethwaite, J. R., Gray, G. S., Hodes, R. J., Bluestone, J. A. Inhibition of transplant rejection following treatment with anti-B7-2 and anti-B7-1 antibodies. Transplantation. Transplantation. 60, 1171-1178 (1995).
- Lenschow, D. J., Zeng, Y., Thistlethwaite, J. R., Montag, A., Brady, W., Gibson, M. G., Linsley, P. S., Bluestone, J. A. Long-term survival of xenogeneic pancreatic islet grafts induced by CTLA4lg. Science. 257, 789-792 (1992).
