췌장 선암 조직의에서 B7-H1의 Immunohistochemical 착색 (PD-L1) 파라핀은 - 임베디드 슬라이드
1The Sidney Kimmel Comprehensive Cancer Center,The Johns Hopkins University School of Medicine, 2Department of Oncology,The Johns Hopkins University School of Medicine, 3Department of Dermatology,The Johns Hopkins University School of Medicine, 4Department of Surgery,Johns Hopkins University School of Medicine, 5The Sol Goldman Pancreatic Cancer Center,The Johns Hopkins University School of Medicine, 6Yale Cancer Center,Yale School of Medicine, 7The Skip Viragh Center for Pancreatic Cancer,The Johns Hopkins University School of Medicine, 8Department of Pathology,The Johns Hopkins University School of Medicine
Summary
B7-H1 (PD-L1) 및 PD-1의 바인딩은 종양의 microenvironment의 주요 종양 유발 면역 신호를 제공합니다. 표현과 췌장 선암의 B7-H1의 국산화를 특성화 할 수 immunohistochemical 얼룩 기법이 여기에 설명되어 있습니다.
Abstract
B7-H1/PD-L1, 면역 규제 세포 표면 단백질의 B7 가족의 일원은 (PD 프로그래밍 사망-1, 그 수용체와의 상호 작용을 통해 세포 매개 면역 반응의 부정적인 규제에 중요한 역할을 -1) 1,2. 종양 세포의 B7-H1의 Overexpression는 흑색 증, glioblastoma, 그리고 폐, 유방, 대장, 난소 및 신장 세포의 carcinomas을 포함 인간 암의 숫자에 기록되었으며, 항 종양 저해하는 표시되었습니다 T를 세포 면역 3-8.
최근 췌장 선암의 조직에 의해 B7-H1 표현은 잠재적 인 전조 마커 9,10로 확인되었습니다. 또한 췌장암의 마우스 모델에서 B7-H1의 봉쇄는 안티 종양 응답 11 생산 보여왔다. 이러한 데이터는 잠재적 인 치료 목표로 B7-H1의 중요성을 권장합니다. 안티 – B7-H1의 봉쇄 항체 따라서 mul에 대한 임상 실험에서 테스트되고 있습니다흑색 증과 폐, 대장, 신장, 위장, 췌장 (12)의 암을 포함 tiple 인간의 고체 종양.
결국 치료를 타겟으로 B7-H1의 혜택을받을 환자를 식별 할 수 있도록 위해서는 표현과 B7-H1과 B7-H1의 봉쇄 항체 치료에 대한 환자 반응의 국산화 사이의 상관 관계를 조사하는 것이 중요합니다. immunohistochemistry를 통해 인간의 췌장 선암의 조직에서 B7-H1의 표현을 조사하면이 공동 억제 신호 분자가 종양의 microenvironment에 antitumor 면역의 억제에 기여하는 방법에 대한 이해를 제공 할 것입니다. 첸과 동료에 의해 개발 된 안티 – B7-H1 단클론 항체 (클론 5H1)가 인간의 neoplastic 조직 4,8의 여러 유형의 cryosections에서 신뢰할 수있는 염색 결과를 생산하기 위해 표시하지만, 파라핀 – 임베디드 슬라이드에 얼룩되었습니다 것은 때까지 도전이었다 최근 13-18. 우리는 개발자가췌장 선암의 조직의 파라핀 – 임베디드 슬라이드에 대한 사랑의 도피를 떠났을 B7-H1의 착색 프로토콜. 여기에 설명 된 B7-H1의 착색 프로토콜은 약간의 배경 B7-H1의 일관성 막과 세포질 염색을 생산하고 있습니다.
Protocol
B7-H1/PD-L1, 면역 규제 세포 표면 단백질의 B7 가족의 일원은 (PD 프로그래밍 사망-1, 그 수용체와의 상호 작용을 통해 세포 매개 면역 반응의 부정적인 규제에 중요한 역할을 -1) 1,2. 종양 세포의 B7-H1의 Overexpression는 흑색 증, glioblastoma, 그리고 폐, 유방, 대장, 난소 및 신장 세포의 carcinomas을 포함 인간 암의 숫자에 기록되었으며, 항 종양 저해하는 표시되었습니다 T를 세포 면역 3-8. <…
Representative Results
B7-H1의 성공적인 immunohistochemical 얼룩은 췌장 선암의 B7-H1 (갈색 신호 DAB 색상 개발)의 이기종 표현을 보여줍니다. 다른 B7-H1 또는 B7-H1 (도 2 및도 3)의 작은 표현 중 하나 주로 세포질 표현을 할 수 있지만 일부 췌장 선암 세포는 B7-H1의 주로 막 표현 (그림 1A)를 갖추고 있습니다. 일반 췌장 덕트 상피는 (그림 4) B7-H1 약간을 표현한다. 마우스 IgG1 κ isotype 제어 항체?…
Discussion
cryosections에서 B7-H1의 Immunohistochemical 착색은 암 3,4의 다양한 사전 연구에서보고되었습니다. 그러나, 임상 종양 샘플을 일반적으로 파라핀 – 임베디드 블록의 형태로 사용할 수 있습니다. 5H1 단클론 항체는 최근 성공적으로 신장 세포 암종, 자궁 경부 암, 방광 암, 흑색 증 13-18 등의 파라핀 포함 된 종양 조직의 착색에 적용되었습니다. 파라핀 – 임베디드 9,19 또는 그라 이오 ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
EB, KMB, 그리고 HX 동일하게 기여하고 있습니다. 이 연구는 위장 암 P50 CA062924, NIH K23 CA148964, Lustgarten 재단, Viragh 재단, ASCO 젊은 연구자 상, NIH 5T32 CA0090701-28 교육 교부금, 솔 골드만 삭스의 췌장암 센터, 국립 췌장 재단에서 NCI의 포자에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
| Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
| Block ACE | Serotec | BUF029 | |
| Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
| Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
| TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
| Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
| 190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
| 200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
| Xylene | VWR | 95057-827 | |
| Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
| Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
| Coverslips | Corning | 2940-245 | |
| Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
| Table 1. Reagents and equipment. |
Referências
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Immunohistochemical StainingB7-H1PD-L1Paraffin-embedded SlidesImmune-regulatory Cell-surface ProteinsNegative RegulationCell-mediated Immune ResponsesReceptorProgrammed Death-1OverexpressionTumor CellsHuman CancersPrognostic MarkerAnti-tumor T-cell ImmunityTherapeutic TargetBlockade AntibodiesClinical TrialsSolid TumorsExpression And LocalizationPatient ResponseTreatment
Citar este artigo
Bigelow, E., Bever, K. M., Xu, H., Yager, A., Wu, A., Taube, J., Chen, L., Jaffee, E. M., Anders, R. A., Zheng, L. Immunohistochemical Staining of B7-H1 (PD-L1) on Paraffin-embedded Slides of Pancreatic Adenocarcinoma Tissue. J. Vis. Exp. (71), e4059, doi:10.3791/4059 (2013).