Pankreas Adenokarsinom Doku B7-H1 immünohistokimyasal boyanma (PD-L1) parafin Slaytlar
Summary
B7-H1 (PD-L1) ve PD-1 olarak bağlayıcı tümörün mikroçevresindeki önemli bir tümör kaynaklı immünsüpresif sinyal verin. Ifade ve pankreatik adenokarsinoma B7-H1 lokalizasyonu karakterize etmek için immünohistokimyasal boyama tekniği burada tanımlanmıştır.
Abstract
B7-H1/PD-L1, bağışıklık düzenleyici bir hücre yüzey proteinlerinin B7 ailesinin bir üyesi, (PD programlanmış ölüm-1, reseptörü ile etkileşim yoluyla hücre-aracılı bağışıklık tepkilerini negatif düzenlenmesi önemli bir rol oynar -1) 1,2. Tümör hücreleri tarafından B7-H1 aşırı ekspresyonu melanom, glioblastom, ve akciğer, meme, kolon, yumurtalık, böbrek ve hücre karsinomları da dahil olmak üzere insan kanserleri, bir dizi belirtildiği gibi, ve anti-tümör zarar gösterilmiştir T- Hücre bağışıklık 3-8.
Son zamanlarda, pankreatik adenokarsinoma dokular tarafından B7-H1 ekspresyonu potansiyel bir prognostik belirteçtir 9,10 olarak tespit edilmiştir. Buna ek olarak, pankreas kanseri, bir fare modelinde, B7-H1 blokajı, bir anti-tümör cevabı 11 üretmek için gösterilmiştir. Bu veriler potansiyel bir terapötik hedef olarak B7-H1 önemini göstermektedir. Anti-B7-H1 blokajı antikorlar nedenle mul için klinik deneylerle test ediliyormelanom ve akciğer, kolon, böbrek, mide ve pankreas kanserleri de dahil olmak üzere 12 tiplemeleriyle insan solid tümörler.
Sonunda tedaviler hedefleme B7-H1 yararlanacak hastaların tespit edebilmek için, bu ifade ve B7-H1 ve B7-H1 blokajı antikorlar ile hastanın tedaviye yanıtı lokalizasyonu arasındaki korelasyonu araştırmak için kritik öneme sahiptir. Immünhistokimya ile insan pankreas adenokarsinomu dokularında B7-H1 ekspresyonu incelenmesi bu co-inhibitör sinyal molekülü tümör mikroçevresindeki antitümör bağışıklık baskılanması nasıl katkıda bulunduğunu daha iyi bir anlayış verecektir. Chen ve arkadaşları tarafından geliştirilen anti-B7-H1 monoklonal antikor (klon 5H1) insan neoplastik doku 4,8 çok tip cryosections güvenilir boyama sonuçları üretmek için gösterilmiştir, ancak parafine gömülü slaytlar leke kadar zor olmuştu Son zamanlarda 13-18. Biz dev varpankreatik adenokarsinoma dokuların parafine gömülü slaytlar için kaçtı B7-H1 boyama protokolü. Burada anlatılan B7-H1 boyama protokolü biraz arka plan ile B7-H1 tutarlı membranöz ve sitoplazmik boyanma üretir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Cryosections B7-H1 immünohistokimyasal boyama Kanseri 3,4 çeşitli önceki çalışmalarda rapor edilmiştir. Bununla birlikte, klinik tümör örnekleri genellikle sadece parafine gömülmüş blok şeklinde kullanılabilir. 5H1 monoklonal antikor daha yakın başarıyla renal hücreli karsinom, serviks kanseri, mesane kanseri ve melanom 13-18 gibi parafin tümör dokularının boyama uygulanmıştır. Parafine gömülü 9,19 veya kriyostat diğer monoklonal antikorlar ile pankreatik …
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
EB, KMB, ve HX eşit katkıda bulunurlar. Bu çalışmada, gastrointestinal kanserler P50 CA062924, NIH K23 CA148964, Lustgarten Vakfı, Viragh Vakfı, ASCO Genç Araştırmacı Ödülü, NIH 5T32 CA0090701-28 Eğitim Bursu, Sol Goldman Pankreas Kanseri Merkezi ve Ulusal Pankreas Vakfı NCI SPORE tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
| Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
| Block ACE | Serotec | BUF029 | |
| Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
| Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
| TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
| Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
| 190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
| 200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
| Xylene | VWR | 95057-827 | |
| Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
| Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
| Coverslips | Corning | 2940-245 | |
| Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
| Table 1. Reagents and equipment. |
Referências
- Flies, D. B., Chen, L. The new B7s: playing a pivotal role in tumor immunity. J. Immunother. 30, 251-260 (2007).
- Dong, H., Zhu, G., Tamada, K., Chen, L. B7-H1, a third member of the B7 family, co-stimulates T-cell proliferation and interleukin-10 secretion. Nat. Med. 5, 1365-1369 (1999).
- Curiel, T. J., Wei, S., Dong, H., Alvarez, X., Cheng, P., Mottram, P., Krzysiek, R., Knutson, K. L., et al. Blockade of B7-H1 improves myeloid dendritic cell-mediated antitumor immunity. Nat. Med. 9, 562-567 (2003).
- Dong, H., Strome, S. E., Salomao, D. R., Tamura, H., Hirano, F., Flies, D. B., Roche, P. C., Lu, J., Zhu, G. Tumor-associated B7-H1 promotes T-cell apoptosis: a potential mechanism of immune evasion. Nat. Med. 8, 793-800 (2002).
- Dong, H., Chen, L. B7-H1 pathway and its role in the evasion of tumor immunity. J. Mol. Med. (Berl). 81, 281-287 (2003).
- Strome, S. E., Dong, H., Tamura, H., Voss, S. G., Flies, D. B., Tamada, K., Salomao, D., Cheville, J., Hirano, F., Lin, W., Kasperbauer, J. L., Ballman, K. V., Chen, L. B7-H1 blockade augments adoptive T-cell immunotherapy for squamous cell carcinoma. Cancer Res. 63, 6501-6505 (2003).
- Hirano, F., Kaneko, K., Tamura, H., Dong, H., Wang, S., Ichikawa, M., Rietz, C., Flies, D. B., Lau, J. S., Zhu, G., Tamada, K., Chen, L. Blockade of B7-H1 and PD-1 by monoclonal antibodies potentiates cancer therapeutic immunity. Cancer Res. 65, 1089-1096 (2005).
- Thompson, R. H., Gillett, M. D., Cheville, J. C., Lohse, C. M., Dong, H., Webster, W. S., Krejci, K. G., Lobo, J. R., Sengupta, S., Chen, L., Zincke, H., Blute, M. L., Strome, S. E., Leibovich, B. C., Kwon, E. D. Costimulatory B7-H1 in renal cell carcinoma patients: Indicator of tumor aggressiveness and potential therapeutic target. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 17174-17179 (2004).
- Geng, L., Huang, D., Liu, J., Qian, Y., Deng, J., Li, D., Hu, Z., Zhang, J., Jiang, G., Zheng, S. B7-H1 up-regulated expression in human pancreatic carcinoma tissue associates with tumor progression. J. Cancer Res. Clin. Oncol. 134, 1021-1027 (2008).
- Loos, M., Giese, N. A., Kleeff, J., Giese, T., Gaida, M. M., Bergmann, F., Laschinger, M., WB, M., Friess, H. Clinical significance and regulation of the costimulatory molecule B7-H1 in pancreatic cancer. Cancer Lett. 268, 98-109 (2008).
- Okudaira, K., Hokari, R., Tsuzuki, Y., Okada, Y., Komoto, S., Watanabe, C., Kurihara, C., Kawaguchi, A., Nagao, S., Azuma, M., Yagita, H., Miura, S. Blockade of B7-H1 or B7-DC induces an anti-tumor effect in a mouse pancreatic cancer model. Int. J. Oncol. 35, 741-749 (2009).
- Wang, S., Chen, L. Immunobiology of cancer therapies targeting CD137 and B7-H1/PD-1 cosignal pathways. Curr. Top Microbiol. Immunol. 344, 245-267 (2011).
- Thompson, R. H., Webster, W. S., Cheville, J. C., Lohse, C. M., Dong, H., Leibovich, B. C., Kuntz, S. M., Sengupta, S., Kwon, E. D., Blute, M. L. B7-H1 glycoprotein blockade: a novel strategy to enhance immunotherapy in patients with renal cell carcinoma. Urology. 66, 10-14 (2005).
- Thompson, R. H., Kuntz, S. M., Leibovich, B. C., Dong, H., Lohse, C. M., Webster, W. S., Sengupta, S., Frank, I., Parker, A. S., Zincke, H., Blute, M. L., Sebo, T. J., Cheville, J. C., Kwon, E. D. Tumor B7-H1 is associated with poor prognosis in renal cell carcinoma patients with long-term follow-up. Cancer Res. 66, 3381-3385 (2006).
- Thompson, R. H., Dong, H., Kwon, E. D. Implications of B7-H1 expression in clear cell carcinoma of the kidney for prognostication and therapy. Clin. Cancer Res. 13, 709s-715s (2007).
- Karim, R., Jordanova, E. S., Piersma, S. J., Kenter, G. G., Chen, L., Boer, J. M., Melief, C. J., vander Burg, S. H. Tumor-expressed B7-H1 and B7-DC in relation to PD-1+ T-cell infiltration and survival of patients with cervical carcinoma. Clin. Cancer Res. 15, 6341-6347 (2009).
- Inman, B. A., Sebo, T. J., Frigola, X., Dong, H., Bergstralh, E. J., Frank, I., Fradet, Y., Lacombe, L., Kwon, E. D. PD-L1 (B7-H1) expression by urothelial carcinoma of the bladder and BCG-induced granulomata: associations with localized stage progression. Cancer. 109, 1499-1505 (2007).
- Brahmer, J. R., Drake, C. G., Wollner, I., Powderly, J. D., Picus, J., Sharfman, W. H., Stankevich, E., Pons, A., Salay, T. M., McMiller, T. L., Gilson, M. M., Wang, C., Selby, M., Taube, J. M., Anders, R., Chen, L., Korman, A. J., Pardoll, D. M., Lowy, I., Topalian, S. L. Phase I study of single-agent anti-programmed death-1 (MDX-1106) in refractory solid tumors: safety, clinical activity, pharmacodynamics, and immunologic correlates. J. Clin. Oncol. 28, 3167-3175 (2010).
- Wang, L., Ma, Q., Chen, X., Guo, K., Li, J., Zhang, M. Clinical significance of B7-H1 and B7-1 expressions in pancreatic carcinoma. World J. Surg. 34, 1059-1065 (2010).
- Nomi, T., Sho, M., Akahori, T., Hamada, K., Kubo, A., Kanehiro, H., Nakamura, S., Enomoto, K., Yagita, H., Azuma, M., Nakajima, Y. Clinical significance and therapeutic potential of the programmed death-1 ligand/programmed death-1 pathway in human pancreatic cancer. Clin. Cancer Res. 13, 2151-2157 (2007).
- Taube, J. M., Anders, R. A., Young, G. D., Xu, H., Sharma, R., McMiller, T. L., Chen, S., Klein, A. P., Pardoll, D. M., Topalian, S. L., Chen, L. Colocalization of inflammatory response with B7-h1 expression in human melanocytic lesions supports an adaptive resistance mechanism of immune escape. Sci. Transl. Med. 4, 127ra37 (2012).
