Isolamento de linfócitos usando a Miltenyi MACs kit é uma maneira confiável para purificar as células de todo homogeneizados de tecido linfóide. Células purificadas usando o sistema Miltenyi são tipicamente ≥ 96% pura. Aqui, nós demonstrar as medidas tomadas para isolar células CD4 + T, um dos muitos kits oferecidos pela Miltenyi.
Abstract
Isolamento de células a partir da fonte primária é um passo necessário em muitos protocolos mais complexos. Miltenyi oferece kits para isolar as células de vários organismos, incluindo seres humanos, primatas não-humanos, ratos e, como descrevemos aqui, camundongos. Separação magnética de células baseado em grânulos permite tanto a seleção positiva (ou depleção de células), bem como seleção negativa. Aqui, demonstramos seleção negativa de CD4 ve intocadas ou nd + células T helper. Usando este protocolo padrão que normalmente purificar as células que estão ≥ 96% CD4 pura + / CD3 +. Este protocolo é usado em conjunto com a dissecação de protocolo e 2-Photon Imagens de linfonodos periféricos em camundongos publicado na edição de 7 de Jove, para purificação de células T e outros tipos de células para adotivamente transferência para fins de imagem. Embora nós não demonstramos análise FACS neste vídeo de protocolo, é altamente recomendável para verificar a pureza total de células isoladas usando os anticorpos adequados via FACS. Além disso, demonstramos o método não-estéril de isolamento de células T. Se as células estéreis são necessários para o seu aplicativo do usuário final particular, não se esqueça de fazer todos os procedimentos demonstrado na capa de cultura de tecidos sob condições padrão estéril. Obrigado por assistir e boa sorte com suas próprias experiências!
Protocol
Por favor, leia e siga o protocolo incluído no kit Miltenyi ou online em http://www.miltenyibiotec.com/ .
Discussion
Isolamento de células a partir da fonte primária é um passo necessário em muitos protocolos mais complexos. Miltenyi oferece kits para isolar as células de vários organismos, incluindo seres humanos, primatas não-humanos, ratos e, como descrevemos aqui, camundongos. Separação magnética de células baseado em grânulos permite tanto a seleção positiva (ou depleção de células), bem como seleção negativa. Aqui, demonstramos seleção negativa de CD4 ve intocadas ou nd + células T helper. Usando este protocolo padrão que norm…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Queremos agradecer Rebecca Paquett para a preparação de tampão MACS.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
MACS Buffer
Reagent
None
None
Prepare as described by Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation
Reagent
Miltenyi
130-090-860
For use with the Miltenyi system.
Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)
Reagent
For use in the preparation of MACS buffer.
Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish
Outro
Corning Cell Culture Surfaces
430588
Used in the preparation of a single cell suspension.
70 micron Cell Strainer
Tool
BD Falcon
352350
Used in the preparation of a single cell suspension.
6 mL Syringe
Tool
Tyco Healthcare
8881516051
Used in the preparation of a single cell suspension.
Matheu, M. P., Cahalan, M. D. Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification. J. Vis. Exp. (9), e409, doi:10.3791/409 (2007).