Выделение лимфоцитов с использованием набора Miltenyi ПДК является надежным способом очищают клетки от целых лимфоидной гомогенатах ткани. Клетки очищали с использованием системы Miltenyi, как правило, ≥ 96% чистой. Здесь мы демонстрируем, шаги, предпринятые для изоляции CD4 + Т-клеток, одна из многих комплектов, предлагаемых Miltenyi.
Abstract
Изоляция клеток от первичного источника является необходимым шагом во многих более сложных протоколов. Miltenyi предлагает комплекты для изоляции ячеек нескольких организмов, включая человека, не человеческих приматов, крысы и, как мы описываем здесь, мыши. Магнитный шарик-ячейкой на основе разделения позволяет либо положительного отбора (или элементов истощения), а также негативный отбор. Здесь мы показываем негативный отбор нетронутой или наивны CD4 + Т-клетки. Используя этот стандартный протокол мы обычно очищают клетки, которые ≥ 96% чистой CD4 + / CD3 +. Этот протокол используется в сочетании с Dissection протокол и 2-Фотон изображений периферических лимфатических узлов у мышей опубликована в выпуске 7 Юпитера, для очистки Т-клеток и другие типы клеток, чтобы восприимчиво передачу для работы с изображениями целей. Хотя мы не продемонстрировали FACS анализ в этом видео протокол, настоятельно рекомендуется проверить общую чистоту изолированных клеток с использованием соответствующих антител с помощью FACS. Кроме того, мы демонстрируем нестерильный способ выделения Т-клеток. Если стерильные клетки необходимы для конкретного конечного пользователя приложения, убедитесь, что сделали все продемонстрировали процедур в капюшоне культуры ткани при стандартных стерильных условиях. Спасибо за внимание и удачи в ваших собственных экспериментов!
Protocol
Пожалуйста, прочитайте и следуйте протокол, входящий в комплект Miltenyi или на сайте http://www.miltenyibiotec.com/ .
Discussion
Изоляция клеток от первичного источника является необходимым шагом во многих более сложных протоколов. Miltenyi предлагает комплекты для изоляции ячеек нескольких организмов, включая человека, не человеческих приматов, крысы и, как мы описываем здесь, мыши. Магнитный шарик-ячейкой на основе разделе?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы хотели бы поблагодарить Ребекка Paquett для подготовки буфера MACS.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
MACS Buffer
Reagent
None
None
Prepare as described by Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation
Reagent
Miltenyi
130-090-860
For use with the Miltenyi system.
Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)
Reagent
For use in the preparation of MACS buffer.
Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish
Outro
Corning Cell Culture Surfaces
430588
Used in the preparation of a single cell suspension.
70 micron Cell Strainer
Tool
BD Falcon
352350
Used in the preparation of a single cell suspension.
6 mL Syringe
Tool
Tyco Healthcare
8881516051
Used in the preparation of a single cell suspension.
Matheu, M. P., Cahalan, M. D. Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification. J. Vis. Exp. (9), e409, doi:10.3791/409 (2007).