Summary

C. elegans 추적 및 행동 측정

Published: November 17, 2012
doi:

Summary

우리는 기록하고 계량화 할 수있는 비디오 속도 추적 현미경 시스템을 개발 한<em> C. elegans</em높은 해상도와 높은 속도로> 동작. 우리는 또한 완전히 웜의 모양을 설명하는 측정의 기본 집합에 웜 이미지의 차원을 줄이기 위해 계산 방법을 개발했습니다.

Abstract

우리는 C.의 locomotory 동작을 수량화하기 위해 계측, 이미지 처리 및 데이터 분석 기술을 개발했습니다 elegans는 한천 플레이트의 표면에 크롤링 있습니다. 행동, C.의 유전자, 생화학, 그리고 neuronal 기초 연구에 대한 이 현미경 의무, 유전자 다루기 쉬운이며, 택시, 학습, 사회 상호 작용 1,2 등의 복잡한 행동의 수를 보여주기 때문에 elegans는 이상적인 유기체입니다. 그들은 한천 플레이트에 크롤링하는 웜의 움직임을 추적에 따라 행동 분석은 감각 동작 3, 운동 4, 및 일반 mutational phenotyping (5)의 연구에 특히 유용했습니다. 우리 시스템은 웜이 더 기계적 자극이 웜에 전송되지 않습니다 보장 고정 한천 플레이트에 크롤링으로 카메라와 조명 시스템을 이동하여 사용할 수 있습니다. 우리의 추적 시스템은 사용하기 쉬운이며, 반자동 보정 기능이 포함되어 있습니다. 차모든 동영상 추적 시스템의 llenge는 차원 본질적으로 높은 데이터의 엄청난 금액을 생성하는 것입니다. 우리 영상 처리 및 데이터 분석 프로그램은 종합적으로 만 3-4 치수 6,7의 기능으로 웜 동작을 재구성 독립적 인 구성 요소의 집합으로 웜 모양을 줄임으로써 이러한 문제를 처리합니다. 과정의 예를 들어 우리는 웜이 위상 특정 방식으로의 반전 상태를 입력하고 종료 보여준다.

Protocol

1. 추적 현미경에 대한 설명 한천 플레이트는 섬유 광원에 의해 조명과 카메라와 이미징 있습니다. 이 시스템은 X, Y 번역 단계에 장착된다. 무대는 스테퍼 모터 컨트롤러에 연결되어있는 표준 스테퍼 모터에 의해 이동된다. 컨트롤러와 카메라가 컴퓨터에 연결되어 LabVIEW로 작성된 사용자 정의 프로그램에 의해 제어됩니다. 카메라는 이미지 한천 플레이트의 표면을?…

Representative Results

예 : foraging, C. elegans 전환 앞으로의 자주 전진 상태로 돌아 가기 전에 reorientation을 (오메가 턴) 수행, 운동을 반대로합니다. 이 전환을 정량화하는 것은 운동의 foraging 패턴을 이해하고 또한 웜의 모터 제어에 중요합니다. 운동 행동의 미묘한 세부 사항을 공개 할 수있는 능력은 우리의 추적 장치를 사용하여 볼 수 있습니다. 예를 들어 우리는 반대로 ~ 30 분의 한천 플레?…

Discussion

운동과 자연 행동의 연구는 데이터 감소 기술과 파트너의 비 침습적 추적 기술이 필요합니다. 여기 C.에 대한 자세한 이미지를 기록 추적 시스템을 사용하기 쉬운을 증명 한 는 한천 플레이트의 표면에 크롤링으로 elegans 행동. 이러한 이미지에 포함 된 정보의 양이 광대 높은 차원이며, 그래서 우리는 네 개의 근본적인 조치로 데이터의 차원을 줄이기 위해 방법을 개발했습니다. 이러…

Declarações

The authors have nothing to disclose.

Materials

Name of the part Company Catalogue number Comments (optional)
CCD camera Basler A601f
Lens Edmund Optics MMS series
Fiber Illumination Dolan Jenner DC-950H
Translation stage Deltron LS3-4
Stepper Motor US digital MS23C
Stepper motor drive Gecko G201
Stepper motor control SimpleStep SSXYZ
All programming code is available. Please send a request email to the corresponding author.

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Citar este artigo
Likitlersuang, J., Stephens, G., Palanski, K., Ryu, W. S. C. elegans Tracking and Behavioral Measurement. J. Vis. Exp. (69), e4094, doi:10.3791/4094 (2012).

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