وارتقى الخلالي تدفق السوائل في الأورام الصلبة، ويمكن أن تعدل ورم غزو الخلية. نحن هنا وصفا لأسلوب لتطبيق الخلالي تدفق السوائل إلى الخلايا جزءا لا يتجزأ من مصفوفة ومن ثم قياس آثارها على غزو الخلية. ويمكن تكييف هذه التقنية بسهولة لدراسة النظم الأخرى.
نمو وتطور الأورام الصلبة معظم تعتمد على التحول الأولي للخلايا السرطانية واستجابتها لسدى المرتبطة يشير في المكروية ورم 1. سابقا، وركز البحث على المكروية ورم في المقام الأول على الورم اللحمية التفاعلات 1-2. ومع ذلك، فإن المكروية ورم تتضمن أيضا مجموعة متنوعة من القوى الطبيعية الحيوية، وآثارها لا تزال غير مفهومة تماما. هذه القوى هي عواقب النشاط الحيوي لنمو الورم التي تؤدي إلى تغيرات في التعبير الجيني، وانقسام الخلايا، والتمايز وغزو 3. يتم تغيير جميع المصفوفة كثافة 4، صلابة 5-6، وهيكل 6-7، ضغط السائل الخلالي 8، وتدفق السوائل الخلالية 8 أثناء تقدم السرطان.
الخلالي تدفق السوائل على وجه الخصوص هو أعلى في الأورام بالمقارنة مع الأنسجة الطبيعية 8-10. ويقدر فلوريدا السائل الخلاليوتم قياس السرعات آه وجدت لتكون في حدود 0،1-3 ميكرومتر ق -1، اعتمادا على حجم الورم والتمايز 9 و 11. هذا يرجع إلى ارتفاع ضغط السائل الخلالي الناجم عن الورم الناجم عن الأوعية الدموية وزيادة نفاذية الأوعية الدموية 12. وقد تبين الخلالي تدفق السوائل لزيادة غزو الخلايا السرطانية 13-14، الليفية الوعائية وخلايا العضلات الملساء 15. هذا قد يكون عائدا لغزو التدرجات الكيميائي ذاتي خلقت حول الخلايا في D-3 16 أو زيادة مصفوفة الفلزي (MMP) التعبير 15، إفراز chemokine والتعبير جزيء التصاق الخلية 17. ومع ذلك، لم يتم الآلية التي تستشعر الخلايا تدفق السوائل مفهومة جيدا. بالإضافة إلى تغيير سلوك الخلية السرطانية، الخلالي تدفق السوائل ينظم نشاط الخلايا الأخرى في المكروية ورم. ويرتبط هذا مع التمايز القيادة (أ) من الخلايا الليفية إلى الأورام وmyofibrأقاليم 18، (ب) نقل من مولدات المضادات، وعوامل أخرى قابلة للذوبان إلى الغدد الليمفاوية 19، و (ج) تحوير التشكل الليمفاوية الخلية البطانية 20.
هذه التقنية المقدمة هنا يفرض الخلالي تدفق السوائل في الخلايا في المختبر، والكمي آثاره على غزو (الشكل 1). وقد تم نشر هذه الطريقة في دراسات متعددة لقياس الآثار المترتبة على تدفق السوائل في انسجة وخلية السرطان غزو 13-15، 17. من خلال تغيير التركيبة مصفوفة، نوع من الخلايا، وتركيز خلية، يمكن تطبيق هذه الطريقة على غيرها من الأمراض، ونظم الفسيولوجية لدراسة الآثار المترتبة على تدفق فراغي في العمليات الخلوية مثل غزو الانتشار، والتفريق، والتعبير الجيني.
هنا وقد وصفت لدينا منهجية لقياس تأثير تدفق الخلالي على غزو الخلايا السرطانية، وذلك باستخدام الخلايا جزءا لا يتجزأ من مصفوفة 3-D داخل خلية إدراج الثقافة. وقد استخدمت هذه الأساليب ومماثلة لدراسة تأثير تدفق الخلالي على مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا 13-15، 17. نهجنا ي…
The authors have nothing to disclose.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
Collagen (Rat Tail) | BD | 354236 | Keep sterile |
Millicell cell culture insert | Millipore | PI8P01250 | 8 μm pore diameter, polycarbonate membrane |
Matrigel | BD | 354234 | Keep sterile |
PBS | Sigma Aldrich | 100M-8202 | 10x for preparing gel solution, 1x for washing steps |
Sodium Hydroxide, 1.0N Solution | Sigma Aldrich | S2770 | Keep sterile |
DMEM 1X | CellGro | 10-013-CV | Keep sterile |
Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | 511150 | Keep sterile |
Penicillin Streptomycin | CellGro | 30002CI | Keep sterile |
Triton X-100 | Sigma Aldrich | X100-500 ml | 0.5% in PBS |
Paraformaldehyde | Fisher Scientific | 04042-500 | 4% in PBS |
Deionized Water | Keep sterile | ||
4′,6-diaminido-2-phenylindole (DAPI) | MP Biomedicals | 0215757401 | 1 mg/ml stock solution |
Mounting Solution | Thermo Scientific | TA-030-FM | |
Trypsin-EDTA | CellGro | 25-052-CI | Keep sterile |